Вгс ат антитела к гепатиту с

Набор реагентов «ВГС-АТ-ИФА-МПБИО» для скрининга вируса гепатита С

Набор «ВГС-АТ-ИФА-МПБИО» предназначен для выявления антител к вирусу гепатита С в сыворотке или плазме крови человека методом иммуноферментного анализа. Он содержит пептиды к различным антигенным детерминантам белков: core, NS4, NS5 вируса гепатита С, полученные методом химического синтеза и рекомбинантный антиген NS3 ВГС.

Отличительные особенности:

  • Простая процедура подготовки и проведения анализа;
  • Диагностическая чувствительность набора реагентов 100%;
  • Диагностическая специфичность набора реагентов — 99,9%;
  • Максимальная скорость проведения анализа (45 минут);
  • Объем исследуемого образца — 10 мкл;
  • Не требует дополнительного оборудования для проведения исследований;
  • Обеспечивает обнаружение антител к ВГС, генотипы 1, 1a, 1b, 1a/b, 2, 2a/c, 2b, 3, 3a, 3a/b, 4, 5 и 6;
  • Качество набора гарантировано применением российских и международных стандартных образцов*.

*Гарантия качества:

Характеристики набора реагентов ВГС-АТ-ИФА-МПБИО определялись при тестировании образцов случайной выборки доноров, пациентов с диагнозом ВИЧ инфекция и коммерческих сероконверсионных панелей.

Диагностическая специфичность определялась при исследовании случайной выборки 17500 доноров из различных центров крови и клиник с предварительно подтвержденным отсутствием инфицирования ВГС. Специфичность при исследовании случайной выборки доноров составила 99,9%.

Диагностическая чувствительность определялась с использованием:

  • 423 образцов с подтвержденным содержанием антител к ВГС. Чувствительность составляет 100%;
  • международных панелей: SeraCare Life Sciences (BBI) — Anti-HCV Low Titer Performance Panel (PHV103), Anti-HCV Low Titer Performance Panel (PHV105), HEPATITIS C SEROCONVERSION Panel HCV Genotype 1a (PHV 908), (PHV 919), (PHV 920), Worldwide HCV Performance Panel (WWHV 301);
  • PeliCheck anti-HCV panels (S2007 liquid and S2258 lyophilized);
  • Natural mono-specific anti-HCV samples Sanquin panel (генотипы 1, 1a, 1b, 1a/b, 2, 2a/c, 2b, 3, 3a, 3a/b, 4, 5 и 6). Чувствительность — 100%

Набор реагентов выявляет антитела к ВГС в сыворотках стандартной панели, содержащей и не содержащей антитела к ВГС («Стандарт АТ (+/-) ВГС», ОСО 42-28-310-02П). Чувствительность — 100%.

Набор реагентов не дает ложноположительных результатов при исследовании сывороток стандартной панели, содержащей и не содержащей антитела к ВГС («Стандарт АТ (+/-) ВГС», ОСО 42-28-310-02П). Специфичность — 100 %.

Регистрационное удостоверение № ФСР 2011/12144 от 13 октября 2011 г.

  • Каталожный номер набора на 96 тестов — 02-12144-096
  • Каталожный номер набора на 192 теста — 02-12144-192
  • Каталожный номер набора на 480 тестов — 02-12144-480

Антитела к hcv обнаружены

На проникновения вируса гепатита С иммунная система реагирует выработкой специальных белков — антител. Антитела попадают в кровь и разносятся по всему организму в поисках вирусных клеток для борьбы с ними. Если в крови человека обнаруживаются антитела -HCV , то это означается, что у него был контакт с вирусом, но вовсе не диагностирует гепатит С в активной стадии. В 20-30% случаев организм способен самостоятельно уничтожить вирус, но антитела-HCV в крови при этом остаются. Для того, чтобы определить был ли контакт с.

Мне ложиться на лапараскопию,а в анализе HCV,обнаружены антитела,сказали нужно дополнительное обследование. Кто сталкивался и как вам ставили диагноз?Может кто был в моей ситуации,перед операцией?Не знаю что и думать,операция очень нужна. Может у кого-то этот анализ был не правдивым и я зря паникую.

Решила написать об этом, т.к. сама столкнулась и не пожелаю никому пережить такое! Как и все сдавала кровь на (вич, гепатиты, сифилис и т.д.) когда вставала на учет в ЖК, т.е. в начале беременности, все анализы хорошие,т.е. Отрицательные! Сдавала платно в ФГУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора. Прошло время и на 30 неделе получаю направление в ЖК снова на эти анализы, не долго думав, решила не тратить деньги и пошла сдавать в нашу зачуханую советскую бесплатную лабораторию, в итоге на приеме у.

Урааа)) Я так рада!! ПРишли

Сегодня сходила в ЖК. Ну что, результаты: скрининг первого триместра- все хорошо, общ.анализы — норма, анализ крови на гормоны — норма, а вот анализ крови на исследование HbS Ag + анти HCV вот что показало: Стоит печать с надписью «HBS -антиген отриц.» , НО! На самом листочке приклеена бумажка с надписью «Результат исследования на наличие антител к ВГС: НЕОПРЕДЕЛЕННЫЙ. Обнаружены только антитела к NS-4 — антителу ВГС». Ёпрст. Что ж за хренотень-то? Г отправила меня к инфекционисту. Зашла в поликлинику -.

Я сдала кровь на торчи и вичи . И у меня обнаружили антитела гепатита с, в форме anti-HCV кач А, Anti-HCV-lgG(NS3-5), Anti-HCV-lgG(core). Я сейчас на 13 недели беременности, безумно переживаю. Хотела спросить это 100%, что я больна или нет? На сколько мне известно, форма lgG это значит что я когда- то либо болела или у меня есть предрасположенность к этому вирусу, если я не права поправте меня пожалуйста. Я болела гипатитом в детстве, но только А, но почему то этого в.

УЗИ Тело матки. Размеры: длина 46мм, передне-задний 40мм, ширина 43мм. Контуры ровные Структура миометрия однородная. М-ЭХО: Толщина 12мм. Контуры ровные. Эндометрий 1 фазы. Правый яичник: 30х26мм. СПКЯ Левый яичник: 36х21мм. СПКЯ Особенности: СПКЯ. Спаечный процесс. Рекомендации: Лапароскопия, Двухсторонняя каутеризация + клиновидная резекция, Разделение спаек + Г8 РЕНТГЕНОГРАФИЯ ОРГАНОВ ГРУДНОЙ КЛЕТКИ. На рентгенограммах органов грудной клетки в прямой и боковой проекции легочные поля без очаговых и инфильтративных теней. Легочный рисунок не изменен. Корни легких структурны, не расширены. Диафрагма обычно расположена, куполы.

Девчонки, у кого такое было? Сдавала анализ крови на исследование HbS Ag + анти HCV и вот что показало: Стоит печать с надписью «HBS -антиген отриц.» , НО! На самом листочке приклеена бумажка с надписью «Результат исследования на наличие антител к ВГС: НЕОПРЕДЕЛЕННЫЙ. Обнаружены только антитела к NS-4 — антителу ВГС». Пошла с этой бумажонкой к инфекционисту. Она говорит: у беременных бывает такое. Ничего толком не объяснила, а только попросила анализ на биохимию. Там все данные в порядке. Все в норме. Она написала.

Пошла я в обычную женскую консультацию, решив что у меня всё в порядке, но не тут то было!! сдала я мазки на инфекции: (анализы сдавала в лаборатории «KDL TEST»МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА МЕТОДОМ ПЦРДНК chlamydia trachomatis — не обнаруженоДНК mycoplasma genitalium — не обнаруженоДНК ureaplasma parvum — не обнаруженоДНК candida albicans — не обнаруженоДНК trichomonas vaginalis — не обнаруженоДНК cytomegalovirus — не обнаруженоДНК Herpes simplex virus I i II — не обнаруженоИ тут я уже обрадовалась, что всё в порядке и мне.

ЧТО И КАК СДАВАТЬ КОГДА НЕ ПОЛУЧАЕТСЯ СТАТЬ МАМОЙ Будущий папа: 1. Спермограмма. Воздержание половой жизни 3-5 дней. Нельзя — алкоголь, сауна, баня, перегрев, нервные нагрузки. По необходимости консультация андролога. 2. Кровь ВИЧ, RW, HBsAg, HCV. (описание см. у Будущей мамы) 3. Кариотипирование. (описание см. Будущей мамы) Будущая мама: 1. Группа крови, резус фактор у обоих супругов. Строго натощак. 2. Общий анализ крови (гемоглобин, эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, СОЭ, цветовой показатель, лейкоцитарная формула). Нежелательно сдавать во время критических дней. Могут оказаться заниженными гемоглобин и железо, а это ненужные.

Случилась беда,нужна срочно помощь! пере пост.14 минут назадДевченки,случилось страшное,обнаружили рак у мамы нашей Танюшки http://www.babyblog.ru/user/lenta/itali у нашей палочки-выручалочки,она именно в этом сообществе помогала многим и многим мамочкам,потому что сама бабушка и знает как нам мамочкам тяжело,она возила тяжеленные сумки от одной мамочки до другой,которая никак не могла сьездить и забрать нужное,она дарила подарки сотням деток здесь,старички сообщества прекрасно знают о чем я,те кто недавно здесь,просто поверьте мне на слово,она просто золотой человек и тут такое горе. Мама сейчас проходит химиотерапию,Танюшка все взяла.

Ох, проблема деликатная дело в том ,что в ЖК мне ставят насительство HCV и направляют меня к Инфикционисту .Все бы ничего , да у меня нет регистрации в Москве , живу с мужем в его кваритре , из своей уютной 3-ки в Санкт-Петербурге выписываться не хочу, а регистрацию не получается пока сделать из-за того ,что квартира в собственности в равных долях у него и его матери , а у меня с ней отношения не очень. Мне бы попасть на прием.

Сегодня забрала наши с мужем анализы: мой кариотип — 46ХХ, мужа — 46ХY.

Все молчат((((((значит совсем плохо(((((((

Девочка 7 месяцев. В роддоме, в три месяца и в шесть месяцев сдавали кровь на HCV антитела обнаружены. У матери и отца ребенка гепатит С. Что делать? Куда обращаться?Инфекциониста детского нет.Педиатр сказал, что до года ничего не предпринимать.

Вгс ат антитела к гепатиту с

Вып. 8 , год 2001

November 1996: 9-12. Current Opinion in Psychiatry 2000; 13:281-283

ГЕПАТИТ С: НЕБЛАГОПРИЯТНЫЕ ДАННЫЕ ДЛЯ ЛИЦ,
ЗЛОУПОТРЕБЛЯЮЩИХ ПСИХОАКТИВНЫМИ ВЕЩЕСТВАМИ

Вирусный гепатит длительное время являлся серьезной проблемой для общественного здравоохранения. В настоящее время известно, что его могут вызывать несколько различных вирусов. В течение многих лет были идентифицированы только два вида вирусов: вирус гепатита А (ВГА) и вирус гепатита В (ВГВ). Первый переносится фекально-оральным путем и является следствием низких стандартов гигиены, тогда как второй находится в крови и передается через кожу или воздействием на слизистые и считается разновидностью вируса, который чаще всего коррелирует со злоупотреблением психоактивными веществами. Результаты многочисленных исследований гепатита В показывают, что у большинства пациентов благодаря выработке антител к ВГВ прекращается размножение вируса, но у немногих он продолжает существовать, либо не вызывая никаких симптомов, либо поддерживая хроническое течение гепатита. Это, в свою очередь, может приводить к развитию цирроза и повышенному риску развития печеночно-клеточного рака. Однако большинство лиц, инфицированных ВГВ, выздоравливают полностью. К тому же была разработана безопасная и эффективная вакцина, которая широко используется, особенно в группах высокого риска. Развитие многочисленных эпизодов гепатита у индивида (как правило, у человека, злоупотребляющего психоактивными веществами), о котором известно, что он инфицирован ВГВ, обычно приписывают инфекционному заболеванию, вызванному ВГА, или обострению заболевания, причиной которого является ВГВ. Затем были выявлены специфические антитела к вирусу, который прежде имел название “вирус не-А, не-В гепатита”, а в настоящее время его называют вирусом гепатита С (ВГС). С момента его открытия во всем мире проводились серьезные исследования, чтобы понять характер вызываемого им гепатита, который в настоящее время действительно считается глобальной проблемой для здравоохранения и одной из главных его задач в новом тысячелетии [1].

Такая серьезная озабоченность вызвана двумя причинами: первая — тяжелое течение гепатита, вызываемого ВГС, вторая — высокий показатель его распространенности во многих частях света. Что касается самого заболевания, примерно у 40% инфицированных лиц наблюдается довольно благоприятный исход — либо полное выздоровление, либо бессимптомное течение заболевания с незначительным поражением печени. Что касается ВГВ, то у многих пациентов гепатит приобретает хроническое течение, вследствие чего они становятся носителями вируса. Из них примерно у 20% развивается цирроз печени, который может стать причиной смерти. Кроме того, отмечается повышенный риск развития печеночно-клеточного рака (1-4% случаев в год среди лиц, страдающих циррозом печени [2]).

Инфекционное заболевание, вызванное ВГС, диагностируется путем выявления специфических антител с помощью иммуносорбентного анализа с ферментной меткой. Если антитела обнаружены, качественный анализ на РНК ВГС указывает на наличие активных вирусов в крови. Доступность диагностических тестов во многих странах позволила провести эпидемиологические исследования; общий средний показатель распространенности, который составляет 3%, свидетельствует о том, что во всем мире может быть 150 млн хронических носителей ВГС, хотя показатели в разных странах неодинаковые. Например, в США у 1,8% населения имеются антитела к ВГС, из которых у 74% обнаружена положительная реакция на РНК ВГС, свидетельствующая о том, что 2,7 млн человек этой страны страдают хроническим вирусным гепатитом С [3]. Эта цифра может быть меньше фактического количества, потому что в исследование не были включены бездомные и заключенные тюрем. Действительно, в настоящее время в США наиболее распространенным является вызываемое ВГС инфекционное заболевание, которое передается через кровь.

Однако среди населения оно распределяется неравномерно. Результаты всех проводимых эпидемиологических исследований последовательно продемонстрировали более высокие показатели распространенности положительной серологической реакции среди лиц, употребляющих инъекционные психоактивные вещества, чем в общей популяции. Например, в Соединенном Королевстве сообщалось о показателе 86% среди лиц, употребляющих инъекционные психоактивные вещества [4], в Австралии — 60-70% [5], в Испании — 70% [6]. Возможно, эти данные не вызывают удивления. Известно, что ВГС (и вирус иммунодефицита человека) передается через кровь, а лица, употребляющие инъекционные психоактивные вещества, склонны делиться наборами для инъекций и прочими личными принадлежностями — все это способствует передаче инфекционного заболевания.

Такие высокие показатели распространенности вируса среди лиц, употребляющих инъекционные психоактивные вещества, вызывают особое беспокойство, потому что эта популяция многочисленна и состоит преимущественно из лиц молодого возраста с очень высокой степенью угрозы их здоровью. Более того, тех, кто злоупотребляет психоактивными веществами, становится все больше, поэтому велика вероятность вспышки инфекционных заболеваний с повышенным риском распространения ВГС от них к остальному населению. Серьезность угрозы здоровью лучше всего иллюстрируется тем фактом, что в промышленно развитых странах ВГС объясняет 20% случаев острого гепатита, 40% случаев цирроза печени в конечной стадии, 60% случаев печеночно-клеточного рака и 30% случаев пересадки печени [2]. Поэтому весьма важно лучше понять естественное течение заболевания и при отсутствии эффективной вакцины повысить качество профилактических мер.

Установлено, что среди лиц, употребляющих инъекционные психоактивные вещества, риск развития инфекционного заболевания начинается с первой инъекции и длится столько времени, сколько индивид их употребляет, даже там, где успешно функционируют программы обмена игл и шприцев (для профилактики ВИЧ-инфицирования) [5]. В этом контексте исследование, в котором оценивалась частота случаев ВГС и ВИЧ-инфицирования в одной выборке австралийцев, употребляющих инъекционные психоактивные вещества [7], представляет особый интерес, поскольку была установлена высокая текущая заболеваемость, вызванная ВГС, однако низкая частота ВИЧ-инфицирования. Авторы полагают, что это может быть обусловлено большим бассейном инфекционного заболевания, вызванного ВГС, или более высокой способностью к трансмиссии, т. е. инвазионной способностью. Результаты этого исследования свидетельствуют о чрезвычайно высоком уровне заболеваемости, связанной с ВГС, среди лиц моложе 20 лет (75,6/100 человеко-лет), по сравнению с 14,7/100 человеко-лет у лиц в возрасте 20-29 лет и 6,6/100 человеко-лет у лиц в возрасте старше 30 лет. Эти данные подтвердились и в других странах и вызывают особое беспокойство, поскольку полагаться на программы обмена шприцев, чтобы контролировать распространение ВГС, вряд ли стоит, возможно, отчасти из-за непрекращающегося пользования различными общими принадлежностями для инъекций [8].

Распространение ВГС на общую популяцию вызывает озабоченность, хотя вероятность передачи вируса инфицированными продуктами крови сократилась почти до нуля в большинстве программ внутривенных вливаний, а передача половым путем, по-видимому, происходит редко, чаще всего у лиц, имеющих многочисленных партнеров. Риск передачи вируса от матери ребенку во время беременности низкий (показатель менее 6%), однако он возрастает при высокой концентрации вирусов в крови и в случаях сопутствующего ВИЧ-инфицирования. По-видимому, ВГС не передается через грудное молоко [2]. Местом, которое явно ассоциируется с высоким риском, является тюрьма, поскольку среди лиц, употребляющих инъекционные психоактивные вещества и находящихся в тюрьме, отмечается высокая частота инфекционного заболевания, вызываемого ВГС. Из проведенных исследований неясно, обусловлено ли оно поведением риска в тюрьме или связью между анамнезом заключения в тюрьму и хаотическим образом жизни, сопровождающимся поведением с риском употребления инъекционных веществ [7]. Однако, какой бы ни была причина, ясно, что в тюрьмах необходимо усилить меры профилактики.

Что касается лечения, то в настоящее время используются интерферон-a (interferon-a) и рибаварин (ribavarin), но признается, что такой метод лечения малоэффективен и непригоден для многих пациентов. В частности, такое лечение противопоказано лицам, не прекращающим употреблять алкоголь в большом количестве и инъекционные психоактивные вещества, из-за риска повторного инфицирования и недостаточно выраженной готовности пациентов точно соблюдать лечебные рекомендации [2]. Из-за отсутствия эффективного метода лечения профилактические меры приобретают еще большее значение, и в дополнение к предпринимаемым попыткам в первую очередь предупредить инфекционное заболевание важно также установить факторы, способствующие прогрессированию и тяжести течения заболевания. Употребление алкоголя, по-видимому, является фактором особенно высокого риска [9], возможно, усиливающим размножение ВГС, что приводит к более тяжелому поражению печени в дополнение к повреждениям, вызываемым непосредственным токсическим действием алкоголя [10]. Сказанное относится особенно к лицам, злоупотребляющим психоактивными веществами, среди которых отмечается высокий показатель злоупотребления алкоголем — на 40% больше рекомендуемого “безопасного” количества [11]. Другим фактором риска считается сопутствующее инфекционное заболевание, вызванное ВГВ, поскольку имеются некоторые объективные данные в пользу того, что это может ускорять процесс поражения печени, обусловленный ВГС [12]. Поэтому можно сожалеть, что проведение вакцинации против ВГВ, как правило, недостаточное [13], а важно не упускать любой возможности для улучшения положения.

Наконец, интересно отметить, что гепатит, вызванный вирусом С, является серьезным заболеванием с угрожающими для жизни последствиями, однако эпидемия последних 20 лет почти не привлекла внимания средств массовой информации. Следовательно, кроме специалистов, работающих в этой области, и лиц, заразившихся этой болезнью (или подверженных риску заболеть), очень мало людей осведомлены об этом. Таким образом, ситуация абсолютно противоположна сложившейся с ВИЧ-инфекцией, при которой с самого начала эпидемии возникли широкомасштабные программы по информированию общественности и прозвучали громкие требования проводить научные исследования. Ученые сразу же приступили к разработке эффективных лекарственных препаратов и вакцин, и для этих целей были выделены дополнительные средства. Разумеется, различие состоит в том, что ВГС в значительной степени, но не полностью, охватывает лиц, злоупотребляющих психоактивными веществами, которых все население часто считает ответственными за их несчастья и не заслуживающими заботы общества. Таким образом, отсутствие эффективного лечения и само заболевание остаются незамеченными и не комментируются. Следовательно, важно, чтобы все специалисты, участвующие в оказании медицинской помощи этим пациентам, защищали их право на доступность высококачественной медицинской помощи, способствовали выработке у них положительного отношения к здоровью (сокращение употребления алкоголя, вакцинация против вируса гепатита В, отказ пользоваться общими принадлежностями для инъекций) и тщательно проводили научные исследования по разработке более эффективных методов лечения.

В дополнение к гепатиту, вызываемому вирусом С, который является очень животрепещущей проблемой, в обзорах, посвященных этой теме, раскрываются также проблемы, связанные со злоупотреблением психоактивными веществами. Авторы тщательно изучили современную литературу, в которой представлены актуальные темы в этой области знания.

ЛИТЕРАТУРА

1. Friedrich MJ. Third millennium challenge: hepatitis C. JAMA 1999; 282:221-222.
2. European Association for the Study of the Liver, Consensus Panel. EASL International Consensus Statement on Hepatitis C. J Hepatol 1999; 30:956-961.
3. Alter MJ, Kruszon-Moral D, Nainan OV, McQuillian GM, Gao F, Moyer LA, et al. The prevalence of hepatitis C virus infection in the United States, 1988 through 1994. N Engl J Med 1999; 341:556-562.
4. Best D, Noble A, Finch E, Gossop M, Sidwell C, Strang J. Accuracy of perceptions of hepatitis B and C status: cross sectional investigations of opiate addicts in treatment. Br Med J 1999; 319:290-291.
5. Crofts N, Jolley D, Kaldor J, van Beek I, Wodak A. Epidemiology of hepatitis C virus infection among injecting drug users in Australia. J Epidemiol Commun Health 1997; 51:692-697.
6. Estaban JI, Viladoin L, Gonzalez A, Roget M, Genesca J, Esteban R, et al. Hepatitis C virus antibodies among risk groups in Spain. Lancet 1989; 2:294-296.
7. van Beek I, Dwyer R, Dore GJ, Luo K, Kaldor JM. Infection with HIV and hepatitis C virus among injecting drug users in a prevention setting: retrospective cohort study. Br Med J 1998; 317:433-437.
8. Hunter GM, Donoghoe MC, Stimson GV, Rhodes T, Chalmers CP. Changes in the injecting risk behaviour of injecting drug users in London. 1990-1993. AIDS 1995; 9:493-501.
9. Serfaty L, Chazouilleres O, Poujol-Robert A, Morand-Joubert L, Dubois C, Chretien Y, et al. Risk factors for cirrhosis in patients with chronic hepatitis C virus infection: results of a case control study. Hepatology 1997; 26:776-779.
10. Uchimura Y, Sata M, Kage M, Abe H, Tanikwaka K. A histopathological study of alcoholics with chronic HCV infection: comparison with chronic hepatitis C and alcoholic liver disease. Liver 1995; 15:300-306.
11. Gossop M, Steward D, Marsden J. NTORS at one year. The National Treatment Outcome Research Study: changes in substance use, health and criminal behaviours one year after intake. London: Department of Health; 1998. 11. Ilan Y, Ashuv Y, Tur-Kaspa R, Shouval D. Chronic hepatitis C virus infection with exposure to hepatitis B virus. Isr J Med Sci 1994; 30:259-263.
12. Wong V, Wreghitt TG, Alexander GJ. Prospective study of hepatitis B vaccination in patients with chronic hepatitis C. Br Med J 1996; 312:1336-1337.

Вгс ат антитела к гепатиту с

Хронический гепатит C

Маркеры вирусного гепатита B у доноров крови и в группах сравнения

Хронический гепатит C: (1)

Латентные формы вирусных гепатитов B и C у лиц молодого возрастa

Латентные формы вирусных гепатитов B и C у лиц молодого возрастa: (1)

В .С. Малышев, А .Г. Тоневицкий, А .М. Ведяков, О .Е. Потехин, Н .А. Арефьева, Ю .В. Сергеев, В.Г. Лунин.

Центральная клиническая больница Медицинского центра УД Президента РФ, Институт трансплантологии и искусственных органов МЗ РФ, Институт аллергологии и клинической иммунологии, Москва.

При обследовании доноров на трансмиссивные инфекции на первое место по распространенности за последние годы вышел вирусный гепатит С (ВГС). Серопозитивные к ВГС лица составляют, по нашим данным, 1,7 % среди первичных доноров. Тесты иммуноблотта на анти-ВГС, применяемые в качестве подтверждающих при положительных/сомнительных результатах ИФА, при исследовании доноров отличаются высоким процентом неопределенных результатов. В группе доноров, отведенных от кроводач по наличию анти-ВГС (18 человек), с сомнительными результатами в иммуноблотте LiaТek HCV III на анти-ВГС (1 человек) или по эпидемиологическим показателям провели повторный анализ на РНК ВГС с помощью двухстадийной (nested) ПЦР (разработка НИИТиИО) и в тесте «Amplicor HCV-test» (Roche) спустя 6-24 месяцев после отвода. Обнаружено наличие РНК ВГС у 5 доноров (25%). Отмечено полное совпадение результатов, полученных в двухстадийной ПЦР и в «Amplicor HCV-test».

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: вирус гепатита С, РНК, доноры крови, ПЦР.

Вирус гепатита С (ВГС) является причиной большинства случаев гепатитов «ни А, ни В» с парентеральным механизмом передачи. ВГС относится к семейству флавивирусов с одноцепочечным РНК- геномом . ВГС-инфекция представляет серьезную проблему для здравоохранения из-за высокой частоты развития хронического гепатита С (хронизация у 75-80 %), с риском развития цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы [ 3 ].

Заражение ВГС индуцирует выработку антител к ВГС (анти-ВГС), которые, ввиду высокой хронизации инфекции, рассматриваются в качестве маркера инфицирования. Уровень анти-ВГС позитивных лиц колеблется от 0,2 — 0,6 % в Северной Европе до 4 — 20 % в Африке. В России анти-ВГС выявляется у 1 — 3 % населения, с более высокими показателями в Сибири и на Дальнем Востоке. При этом наблюдается дальнейший рост числа инфицированных [1]. При скрининге донорской крови определяют антитела к вирусу гепатита С. Однако данный подход не в полной мере предотвращает случаи посттрансфузионных гепатитов [6]. В связи с этим в некоторых странах Западной Европы с 1999г. введено обязательное тестирование донорской крови на РНК ВГС, основанное на полимеразной цепной реакции (ПЦР) и широко применяемое в диагностике и мониторинге ВГС-инфекции [ 2].

Оценка актуальности тестирования доноров крови на РНК ВГС с помощью различных ПЦР-методик: двустадийной (nested) и теста Amplicor hepatitis C virus test (Roche).

Материалы и методы. В работе рассмотрены результаты исследования, выполненного в Центральной клинической больнице МЦ УД Президента РФ и в НИИТиИО МЗ РФ. Было обследовано 20 доноров отделения «Банк крови» с положительными/сомнительными данными при тестировании на анти-ВГС. Данные по биохимическим показателям (активность трансаминаз АЛТ и АСТ) и маркеры вирусного гепатита В (антитела к HBs и к HBc) получены при рутинном обследовании доноров. Подробная характеристика доноров представлена в таблице 1.

Определение антител против вируса гепатита С. Скрининг сыворотки крови доноров проводили при каждой кроводаче с помощью иммуноферментной тест-системы UBI HCV EIA 4.0 (United Biomedical Inc. USA). Данная тест-система содержит сорбированные синетические пептиды , соответствующие основным антигенным участкам белков ВГС: Сor, NS3, NS4 и NS5, что позволяет выявлять антитела класса IgG соответствующей специфичности в сыворотке крови. Анализ спектра специфичности антител к белкам ВГС проводили в тесте иммуноблотта с помощью тест-системы LiaТek HCV III (Organon Тeknika), позволяющей раздельно учитывать следующие специфичности антител: Сor ( 2 специфичности), Е2/NS1, NS3, NS4 и NS5. Данные до 1996 г. получены при использовании более ранней версии тест-системы LiaТek, включавшей аналогичные пептиды, за исключением Е2/NS1 и NS5.

Детекция РНК ВГС с помощью тест-системы Аmplicor hepatitis C virus test. Детекцию РНК вируса гепатита С проводили согласно инструкции, прилагаемой фирмой. Амплификацию осуществляли на амплификаторе Perkin Elmer 2400.

Детекция РНК ВГС методом двустадийной (nested) ПЦР с использованием фермента Tth-ДНК -полимеразы. Для выделения РНК использована модифицированная методика, описанная ранее[5]. РНК выделяли из 200 мкл плазмы. Полученную РНК растворяли в 15 мкл буфера для элюции РНК. Для синтеза кДНК и 1 раунда ПЦР 10 мкл полученной РНК. Реакцию обратной транскрипции (RT) и 1-й раунд ПЦР проводили в объеме 25 мкл в одной пробирке с использованием фермента Tth-полимеразы с высокой степенью RT-активности (ВНИИ СБ РАСХН , Россия). Реакционная смесь для 1-раунда ПЦР состояла из 1Х Tth one tube RT-PCR буфера, 2,5 Ед Tth-днк- полимеразы 0,2 мM каждого из 4, дезоксинуклеозидтрифосфатов (дАТФ, д ЦТФ, дТТФ, дГТФ), 10 мкл РНК и по 10 пмоль внешних праймеров [8 ]:

5′-3′ — ctg tga gga act act gtc tt- прямой

5′-3′ — tat cag gca gta cca caa gg-обратный

Для 2 раунда ПЦР брали 0,5 мкл продукта 1 раунда амплификации. 2-й раунд ПЦР проводили с помощью Taq ДНК-полимеразы в объеме 25 мкл. ПЦР проводили в объеме 25 мкл. Стандартная реакционная смесь включала: 67 мМ Трис-НCl (рН 8,4),16 мМ сульфата аммония, 2,5 mM MgCl2 0,125 мг/мл бычьего сывороточного альбумина, 8% глицерин, 0,001% ксиленцианол, 2,5 Ед Taq-ДНК-полимеразы (ВНИИ СБ РАСХН, Россия), 0,2 мМ каждого из четырех дезоксинуклеозидтрифосфатов и по 8 пкмоль внутренних праймеров [8]:

5′-3′ — ttc acg cag aaa gcg tct ag — прямой

5′-3′ -acc caa cac tac tcg gct ag — обратный

RT-ПЦР проводили на многоканальном амплификаторе «Терцик» МС-2 (ДНК-технология, Россия) по следующей программе:

RT + 1 раунд ПЦР:

75 0С — 5 мин., 560С — 35 мин., 940 С — 2 мин.,

56 0 С — 10 сек | 40 циклов

55 0 С — 10 сек | 28 циклов

Детекцию продуктов реакции проводили методом электрофореза в 2% агарозе c 0,001% этидиум бромида, с последующей визуализацией в ультрафиолете на трансиллюминаторе. Для исключения ложноположительных результатов вследствие контаминации детекцию продуктов ПЦР и работу с продуктами 1 раунда проводили в отдельных комнатах, 30% исследуемых образцов составляли негативные контроли.

Лабораторная диагностика гепатита C

М.И.Михайлов, Институт эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи РАМН, Москва

При постановке диагноза «гепатит С» необходимо учитывать следующие наиболее важные факторы:

  • показатели активности «печеночных» ферментов;
  • наличие или отсутствие маркеров инфицирования вирусом гепатита С (ВГС) и другими гепатотропными вирусами;
  • данные эпидемиологического анамнеза;
  • результаты клинического осмотра пациента. Только комплексный учет данных факторов позволяет с высокой степенью надежности диагностировать это заболевание. Лабораторный работник должен предоставить объективную информацию о выявленном спектре вирусных антигенов и антител, а также РНК ВГС, позволяющую клиницисту, сотруднику службы переливания крови и врачу-эпидемиологу решать стоящие перед ними задачи. Чаще всего это:
  • выявление лиц с наличием ВГС для снижения уровня посттрансфузионного гепатита С;
  • постановка диагноза и разграничение острого и хронического гепатита С;
  • прогноз заболевания;
  • назначение, оценка и прогноз эффективности проводимой терапии;
  • изучение широты распространения ВГС в популяции и различных группах населения.
    При этом основными направлениями работ, выполняемых лабораторными сотрудниками, являются:
  • разработка и выбор наиболее информативных методов выявления маркеров инфицирования ВГС;
  • определение критериев объективной оценки полученных результатов;
  • разработка оптимальных алгоритмов проведения лабораторных исследований;
  • внедрение системы повышения качества выявления маркеров инфицирования ВГС.

    Основой лабораторной диагностики гепатита С служат знания о ВГС, его репликации, информация о динамике появления и исчезновения маркеров инфицирования, а также современные иммунохимические и молекулярно-биологические методы детекции антигенов, антител и нуклеиновых кислот.

    ВИРУС ГЕПАТИТА С. ВГС впервые был идентифицирован в 1988 году, когда группа исследователей во главе с М. Houghton и Choo Q.L, применив новые молекулярнобиологические методы исследования, клонировала и секвинировала геном вируса [I]. Частица вируса гепатита С имеет сферическую форму со средним диаметром около 50 нм [2,3]. Попытки визуального обнаружения и изучения строения вируса гепатита С предпринимались с момента открытия вируса, однако до сих пор отсутствуют хорошо документированные результаты этих исследований, что, возможно, связано с трудностями накопления вирусных частиц в необходимых количествах.

    ВГСединственный член рода Hepacivirus в семействе Flaviviridae, в которое входят такие вирусы, как вирус диареи быков и лихорадки свиней (род Pestivirus) и вирус желтой лихорадки, вирус дэнге и GB-вирусы: GBV-A, GBV-B и GBV-C/HGV (род Flavivi-rus). Схема строения вируса гепатита С может быть представлена следующим образом (схема № 1). Нуклеокапсид содержит РНК вируса гепатита С. Сверху нуклеокапсид покрыт липидной оболочкой с утопленными в ней оболочечными белками, кодированными РНК ВГС. Геном вируса представлен однонитевой линейной молекулой РНК положительной полярности, протяженностью около 9600 нуклеотидов. Организация генома ВГС подобна другим флавивирусам. В нем выделяют две зоны, кодирующие структурные и неструктурные (функциональные) белки. Гены, кодирующие структурные белки, расположены у 5′ области генома вируса, а неструктурные у 3′ области. Ген ВГС имеет одну открытую рамку считывания (ОРС), единый полипептид (приблизительно в 3000 аминокислот), который под действием вирусных и клеточных протеаз нарезается на структурные и неструктурные белки.

    Рис. 1. Структурные элементы HCV

    К структурным белкам относят белки, кодированные Core, El и Е2 зонами РНК ВГС. Выявлено три формы С-белка ВГС: полноразмерная (р21) с молекулярной массой — 21 kD, усеченная (р19) и форма (р16), обнаруженная в ядрышках инфицированных гепатоцитов. На своей поверхности С-белок несет различные высококонсервативные В-клеточные эпитопы, существование которых чрезвычайно важно для выявления антител к ВГС в процессе лабораторной диагностики гепатита С.

    Зоны РНК ВГС — Е1 и Е2 кодируют белки с молекулярной массой 31 и 70 kD . Эти белки имеют несколько участков N-гликозилирования; в Е1 белке определено до 6 таких участков, а в Е2 — 11. В участке Е2 заключена информация о небольшом белке — р7, который в структуре вируса не обнаружен.

    Обозначение регионов, расположенных ближе к 3′- концу РНК ВГС — как зон, несущих информацию о неструктурных белках вируса, указывает на то, что эти белки не являются структурными компонентами вирусной частицы. В неструктурной зоне РНК ВГС выделяют участки, обозначенные как: NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A и NS5B. Большинство из белков, кодированных неструктурными зонами РНК ВГС, необходимы для репликации вируса.

    Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей РНК изолятов ВГС, полученных в различных регионах мира и даже в процессе заболевания от одного и того же пациента, выявил основную особенность этого вируса — высокую гетерогенность РНК. Положение о значительной генетической вариабельности РНК ВГС легло в основу теорий, объясняющих: длительное (иногда пожизненное) носительство вируса, частое развитие хронического заболевания, трудности в терапии и создании эффективных вакцинных препаратов. Наиболее значительные отличия последовательностей РНК ВГС сосредоточены в N-концевой части региона Е2, которую обозначают — «гипервариабельный регион» (HVR) [4].

    В настоящее время определено 6 основных генотипов и свыше 100 субтипов ВГС. Генотипы 1а, 1в, 2а, 2в, 2с и За составляют более 90% HCV-изолятов, полученных в Северной и Южной Америке, Европе, России, Китае, Японии и Австралии/Новой Зеландии [5]. Генотипы 4, 5а и 6 соответственно регистрируются в Центральной и Южной Африке, Юго-Восточной Азии. В России и странах СНГ зарегистрировано преобладание генотипа 16 (не менее 68,9%) [6,7]. Считается, что пациенты, инфицированные генотипом 1 (особенно 1в), отвечают хуже на лечение по сравнению с пациентами, инфицированными другими генотипами вируса.

    У больного ВГС циркулирует как популяция частиц вируса, у которых геномы отличаются друг от друга на 1-2% (квазиспецифичности) в результате мутаций, накапливающихся во время инфекции и/или попавших в организм пациента при заражении. Эти мутантные формы могут способствовать более активной репликации или могут помогать вирусу уклоняться от иммунного ответа организма и потенциально влиять на исход острой инфекции, различия в течении заболевания и ответе на интерферонотерапию [8].

    ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИ-ВГС. После открытия вируса ВГС и определения его роли в развитии посттрансфузионного гепатита — «ни А, ни В» перед исследователями стояла задача разработать методы, способные выявлять лиц с ВГС и пригодные для диагностики острого и хронического гепатита С. Было установлено, что антигены ВГС циркулируют в чрезвычайно низких концентрациях, и очевидно, что методический уровень конца 80-х годов XX века, применяемый для детекции вирусных антигенов, был явно недостаточен.

    В 1989 году группа исследователей фирмы «Chiron Corporation» под руководством Q-L.Choo осуществила клонирование РНК ВГС и получила иммунореактивные олигопептиды, вступающие в реакцию с антителами, циркулирующими в крови больных хроническим гепатитом «ни А, ни В». Эти олигопептиды стали основой диагностических препаратов для выявления антител к ВГС. Это определило быстрый прогресс в разработке и промышленном выпуске диагностических препаратов. Основным методом, применяемым для детекции анти-ВГС, стал твердофазный иммуноферментный анализ, как метод, отвечающий требованиям практического здравоохранения -т.е. обладающий высокой чувствительностью, специфичностью и простотой проведения.

    Учитывая, что ВГС персистирует в крови больных острым и хроническим гепатитом С одновременно с анти-ВГС, внимание разработчиков диагностических препаратов концентрировалось на создании тест-систем для детекции антител, обеспечивающих максимально полное выявление носителей вируса и максимально ранние сроки диагностики острой инфекции. Многообразие антигенов и антигенных детерминант, кодированных структурной и неструктурной зоной РНК ВГС, определило направление в конструировании диагностических препаратов выбором и аранжировкой олигопептидов, применяемых для их создания. За время, прошедшее с момента открытия ВГС, созданы диагностические системы трех поколений ( таблица 1).

    Таблица 1
    Диагностические препараты для выявления анти-ВГС [9]

    Применяемые пептиды,
    зоны РНК ВГС, в которых
    они кодированы

    % выявления носителей
    ВГС

    Время первого
    выявления
    анти-ВГС от
    начала желтухи

    5-1-1 NS3
    С100-3 NS4

    С22-3 Core
    С200 NS3 и NS4
    СЗЗс NS3
    С 100-3 NS4

    С22-3 Core
    С200 NS3 и NS4
    СЗЗс NS3
    Пептид NS5

    Введение дополнительных пептидов, прежде всего с22-3 (Core), в диагностические препараты 2-го и 3-го поколения позволило решить главную задачу, то есть увеличить чувствительность, специфичность и, самое главное, выявляемость анти-ВГС . Благодаря диагностикумам 3-го поколения удается выявлять до 97% носителей ВГС. Вместе с тем, определенную дискуссию вызвало решение о введении в диагностикум пептида, кодированного NS5 регионом РНК ВГС. По мнению некоторых исследователей, присутствие этого пептида не имеет принципиального значения для улучшения качества диагностического препарата. [10,11]. Однако антитела к NS5 могут быть выявлены в более ранние сроки инфекции, что улучшает качество лабораторной диагностики острого гепатита С. [12].

    В настоящее время во всем мире, в том числе и в России, применяются диагностические препараты 3-го поколения. Пептиды, применяемые в диагностических препаратах, получены при помощи рекомбинантной технологии (например, диагностикумы фирм: «Диагностические препараты», г. Нижний Новгород; «Вектор» г. Новосибирск; «Roche»; «Abbott» и др.), или синтетической (000 МЦ «Авиценна» г. Санкт-Петербург; «Organon» и др.). Диагностикумы, в которых одновременно использованы оба вида пептидов, получили обозначения, как препараты 4-го поколения. По своим характеристикам эти препараты не обладают значимыми различиями. Сравнительные испытания, регулярно проводимые МЗ России, продемонстрировали сопоставимую чувствительность диагностических препаратов отечественных и зарубежных производителей.

    Установлено, что применение диагностикумов 3-го поколения для выявления анти-ВГС среди иммунокомпетентного населения (например, доноров крови) оценивается в 98,8-100%. В то же время среди иммунокомпрометированных лиц, например, таких как пациенты после трансплантации почки, костного мозга или лица, инфицированные ВИЧ, этот показатель значительно ниже — 50 — 95% [12]. S.George с соавт. [13] продемонстрировали, что у 8,4% больных ВИЧ-инфекцией регистрируются ложно-негативные результаты выявления анти-ВГС. Причем у таких пациентов в процессе наблюдения может регистрироваться серореверсионный эффект, т.е. регистрация позитивного результата после серонегативного анти-ВГС периода [14].

    Одна из наиболее важных проблем при проведении исследований на наличие анти-ВГС — ложнопозитивные результаты. Их появление может быть связано с неспецифическим взаимодействием компонентов реакции, возможными перекрестными реакциями с другими вирусными антигенами и многими другими факторами. Уровень ложно-позитивных результатов при выявлении анти-ВГС с различными диагностическими препаратами может достигать 10-20% [15,16]. Повышенный уровень таких результатов отмечен среди больных онкологическими и аутоиммунными заболеваниями, лиц с иммунодефицитными состояниями и больных сифилисом [16,17]. Существование ложнопозитивных результатов ставит перед лабораторным работником задачу их разграничения с истинным выявлением анти-ВГС. Для решения этой задачи служит обнаружение в образце сыворотки крови РНК ВГС. Однако отрицательный результат обнаружения РНК ВГС не позволяет говорить о наличии ложнопозитивного выявления анти-ВГС. Необходимо учитывать, что анти-ВГС могут изолированно циркулировать в крови пациента, который выздоровел после острого гепатита С (10-15%) или у которого произошла элиминация РНК ВГС в результате проводимой терапии.

    КОНФИРМАЦИОННЫЕ (SUPPLEMENTAL) ТЕСТЫ. Для разграничения ложнопозитивных образцов и образцов, действительно содержащих антитела к ВГС, разработаны дополнительные (Supplemental) тесты. Наиболее часто в этих тестах используется принцип иммуноблота [например — тест RIBA («Ortho-Clinical Diagnostics»); «LiaTek HCV» (Organon Teknika)], когда на нитроцеллюлозной мембране адсорбируются в виде отдельных полос антигены, кодированные различными зонами РНК ВГС. Анти-ВГС взаимодействуют с адсорбированными антигенами с помощью меченных ферментом антител против Ig G человека с последующей их детекцией при помощи субстратного комплекса. Помимо иммуноблота в качестве дополнительных тестов также используют диагностические препараты для выявления анти-ВГС против конкретных антигенов, кодированных различными зонами РНК ВГС [«Спектр 4» («Имбио», г. Нижний Новгород; РекомбиБест АНТИ-ВГС-СПЕКТР» — ЗАО «Вектор Бест», г. Новосибирск; ИФА- Анти-НСУ-Спектр, НПО «Диагностические системы», г. Нижний Новгород].

    Разработка и внедрение этих тестов идет параллельно с внедрением скрининговых тестов для выявления анти-ВГС, повторяя принцип расширяющегося спектра использованных пептидов в каждом последующем поколении диагностических препаратов. Так, диагностикум RIBA-III отличается от предыдущего поколения добавлением пептида, кодированного зоной NS5. Принципы, позволяющие подтвердить позитивный результат выявления анти-ВГС, прежде всего включают: возможность (в некоторых случаях) получения более четких результатов ферментативной реакции при взаимодействии с отдельными пептидами, а также применение в диагностикуме расширенного спектра пептидов, которые не используются в скрининговых тестах. Только введение новых пептидов позволяет повысить диагностическую ценность подтверждающих тестов.

    Трактовка полученных результатов, например в таком тесте, как RIBA-III, включает три возможных ответа : позитивный, негативный и неопределенный результат. Последний из них выдается в случае отсутствия четких показаний (согласно инструкции, прилагаемой к диагностическому набору), позволяющих определенно судить о наличии или отсутствии анти-ВГС в исследуемом образце. Соотношение спектра регистрируемых ответов при проведении подтверждающих тестов колеблется в зависимости от характеристик групп пациентов, у которых первично выявлены анти-ВГС [18]. По данным J.M. Pawlotsky с соавт. [19], в половине случаев результатов, трактуемых как «неопределенные», удается обнаружить РНК ВГС. На наш взгляд, правомочность ответа — «неопределенный результат выявления анти-ВГС», выдаваемого лабораторным работником клиницисту, очевидна не только при проведении подтверждающего теста, но и рутинном исследовании на наличие анти-ВГС. Необходимость такой трактовки полученных результатов является отражением современного состояния лабораторной диагностики гепатита С.

    ОПРЕДЕЛЕНИЕ IgM АНТИ- ВГС. В настоящее время созданы и промышленно выпускаются диагностические наборы для выявления IgM анти-ВГС фирмами: «Вектор Бест»; «Диагностические системы»; «Имбио», «Abbott» и др. На этапе конструирования диагностических наборов были созданы наборы для ИФА, основой которых являлись пептиды, кодированные различными регионами РНК ВГС [20] . Выбор был остановлен на пептиде, кодированном Core регионом РНК ВГС и выявлении антител к нему класса IgM. Так же как и при использовании тестов для выявления анти-ВГС (IgG), при исследовании IgM анти-ВГС могут быть зарегистрированы ложнопозитивные результаты. По данным Stevensona D.L. с соавт. [21], до 70% больных с хроническим гепатитам С с наличием IgM анти-ВГС одновременно имели повышенный уровень ревматоидного фактора, который способствует появлению ложнопозитивных результатов. Вместе с тем, по мнению Pawlotsky J.M., наличие ревматоидного фактора не влияет на качество выявления IgM анти-ВГС [22].

    ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИГЕНОВ ВГС. Возможность определения антигенов ВГС привлекала внимание исследователей сразу же после открытия вируса. Принципиальная возможность их тестирования была продемонстрирована К. Krawczynski с соавторами [23], которые иммуногистохимически обнаружили в печеночной ткани антигены ВГС, доказав специфичность иммунофлюоресцентного свечения. Применение поли- и моноклональных антител к различным антигенам ВГС установило наличие ВГС core Ag, антигенов, кодированных NS3 и NS4 зонами РНК ВГС, в ядре и цитоплазме гепатоцитов, у 60-90% больных хроническим ГС [24].Однако дальнейшие исследования продемонстрировали, что антигены ВГС удается обнаружить менее чем в 5% печеночных клеток.

    Первые диагностические тест-системы («Ortho Antibody to Core Antigen (Murine Monoclonal) EL1SA Test System» и «Imucheck F-HCV Ag Core Kokusai») для выявления антигена ВГС появились на рынке иммунобиологических препаратов в 1999 году. В качестве цели детекции был избран Core антиген ВГС, который определяют при помощи твердофазного варианта ИФА, сконструированного на основе моноклональных антител. Первые исследования по применению этих тестов определили их высокую чувствительность, специфичность, и перспективность применения, прежде всего, в службе переливания крови [25,26]. Установлены:

  • возможность определения Core Ag ВГС в сыворотке или плазме крови;
  • специфичность выявления Core Ag ВГС;
  • наличие лиц с циркулирующим антигеном в крови серонегативных по анти-ВГС;
  • частое (90,3%) обнаружение Core Ag ВГС в сыворотках крови с наличием анти-ВГС и РНК ВГС [25];
  • прямая корреляция между концентрацией РНК ВГС и выявлением Core Ag ВГС [25];
  • сокращения фазы «окна» — от момента инфицирования до первого позитивного результата выявления анти-ВГС . Определено, что Core Ag ВГС удается выявлять в 83% случаев (n=24) на следующий день после первого обнаружения РНК ВГС [26] и задолго (в среднем 26 дней) до появления анти-ВГС [27].

    МЕТОДЫ ОБНАРУЖЕНИЯ РНК ВГС. Современный этап лабораторной диагностики гепатита С можно охарактеризовать как этап начала широкого применения молекулярно — биологических методов выявления РНК ВГС. Подавляющее большинство методов выявления нуклеиновых кислот было апробировано для выявления РНК ВГС. Принципам конструирования диагностических препаратов и их применению для детекции вирусных ДНК или РНК посвящено значительное количество литературных обзоров, опубликованных как в отечественных [28], так и зарубежных изданиях [29]. Все эти методы можно разделить на две группы, в основе которых лежит применение принципов гибридизации без амплификации избранного участка нуклеиновой кислоты или с их амплификацией, что позволяет значительно повысить разрешающую способность метода.

    Метод гибридизации основан на соединении меченных гибридизационных зондов (генноинженерные или синтетические молекулярные структуры, содержащие в себе нуклеотидные последовательности, комплементарные избранным участкам РНК). Учет результатов осуществляют по интенсивности сигнала, поступающего от метки в составе образовавшегося комплекса.

    При гепатите С этот метод выявления РНК ВГС прежде всего нашел применение для ее идентификации непосредственно в гепатоцитах, в тестах обозначаемых — in situ hibidization [30]. Возможность непосредственной детекции РНК ВГС в ткани позволила обнаружить ее в мононуклеарных клетках крови, клетках слюнных желез и других тканях организма больного гепатитом С [31,32].

    Метод гибридизации, применяемый для детекции РНК ВГС, позволяет продемонстрировать наличие негативных (репликативных) цепей РНК ВГС, что свидетельствует об активной репликации вируса [33].

    Метод полимеразнной цепной реакции — в настоящее время наиболее широко применяемый методический прием, лежащий в основе практически всех молекулярно-биологических методов детекции РНК ВГС. Причем определение РНК ВГС возможно как в качественном, так и количественном варианте, что особенно важно для назначения, мониторинга и оценки эффективности применяемой терапии.

    В качестве основных вариантов метода можно выделить:

  • полимеразную цепную реакцию (ПЦР);
  • лигазную цепную реакцию;
  • NASBA;
  • ТМА (Реакция транскрипционно опосредованной амплификации, Transcrip-tion-mediated amplification).

    Полимеразная цепная реакция широко применяемый как в России, так и за рубежом метод детекции РНК ВГС. В его основе лежит многоцикловой процесс, напоминающий естественную репликацию нуклеиновой кислоты, причем каждый цикл состоит из последовательных этапов.

    Из исследуемого материала (сыворотка или плазма крови, печеночный биоптат) выделяется РНК ВГС. Учитывая, что нуклеиновая кислота ВГС представлена РНК, а для амплификации необходима молекула кДНК, при помощи фермента — обратной транскриптазы, происходит образование однонитевых молекул кДНК ВГС. На следующем этапе к определенному участку каждой из цепей кДНК ВГС присоединяются т.н. праймеры — короткие олигонуклеотиды, комплементарные известным нуклеотидным последовательностям. Сравнение первичной структуры 5’UTR области генома различных изолятов ВГС выявило их незначительную изменчивость (между генотипами, гомология нуклеотидов — 92-98%, а внутри генотипа 98-99%). Это сделало предпочтительным выбор праймеров из этой зоны РНК ВГС и их применение в диагностических тест-системах, выпускаемых у нас в стране и за рубежом.

    Далее, при помощи фермента ДНК- зависимой ДНК полимеразы происходит синтез новых участков ДНК. В настоящее время в качестве источника этого фермента чаще всего используют бактерии Thermophilus termus (Tth-полимераза) или Thermophilus aquaticus (Taq-полимераза). Обладая термостабильностью в присутствии ионов марганца и магния, этот фермент может быть одновременно использован для синтеза комплементарных одноцепочечных молекул кДНК ВГС и амплификации избранных участков кДНК. На завершающем этапе одного цикла реакции, при помощи ДНК полимеразы происходит синтез новых цепей комплементарных кДНК ВГС. Многократное повторение циклов реакции приводит к накоплению фрагментов кДНК ВГС, которые возможно зарегистрировать при помощи электрофореза в полиакриламидном геле с последующей визуальной детекцией или же с применением гибридизации с олигонуклеотидными зондами, что увеличивает чувствительность и специфичность применяемых диагностических препаратов. Применение праймеров, меченных ферментами, позволяет проводить учет результатов ПЦР при помощи иммуноферментного анализа.

    Постоянная цель, стоящая перед исследователями, конструирующими диагностические системы для выявления РНК ВГС, — повышение чувствительности и специфичности. Этой цели служит вариант ПЦР, обозначенный — «гнездовой ПЦР» (nested PCR) [34]. Отличительной особенностью этого метода от «классического» является одновременное использование двух пар праймеров, одна из которых комплементарно связывается с внутренним участком ампликона, полученного после первого раунда амплификации. Вместе с тем считается, что при этом варианте ПЦР более высок риск контаминации образцов, что может привести к ложноположительным результатам [35] .

    Острая потребность в определении РНК ВГС и сложности, связанные с крупномасштабным производством высокочувствительных и специфичных диагностических наборов для ПЦР диагностики, определили широкое применение препаратов, изготовленных в научных лабораториях. Сравнение этих тест-систем, так называемых — «домашних» тестов («in house tests»), продемонстрировало их высокую вариабельность по чувствительности и специфичности, а также отсутствие воспроизводимости результатов между лабораториями и сериями диагностических препаратов. Так, при проведении первого Европейского цикла «внешнего» контроля качества оценки выявления РНК ВГС (1996 г.) из 136 лабораторий только 22 (16%) смогли абсолютно правильно определить наличие или отсутствие вирусной РНК в предоставленных контрольных образцах [36]. Подобный результат отмечен и в нашей стране, во время проведения аналогичной работы в рамках Федеральной системы внешнего контроля качества (2001 г.), когда из 14 участвующих лабораторий лишь 3 (21,4%) смогли правильно решить поставленную задачу [37].

    Причины появления ложнонегативных и ложнопозитивных результатов выявления РНК ВГС разнообразны. При ложноотрицательных результатах:
    — потеря или разрушение РНК ВГС в ходе подготовки к реакции клинического материала;
    — наличие в образце ингибиторов, влияющих на различные компоненты ПЦР. Эти ингибиторы представлены различными химическими или белковыми субстанциями. Например: наличие в спермальной жидкости ингибиторов обратной транскриптазы не позволяло обнаружить РНК ВГС и говорить о возможности реализации полового пути передачи гепатита С [38]; наличие гепаприна [39]; высокий уровень криоглобулинов в сыворотке крови [40];
    — несоблюдение теплового режима хранения и транспортировки клинического материала. При ложнопозитивных результатах:
    — контаминация между пробами (при обработке образцов и/или работе с реакционной смесью), в том числе и контаминацией позитивным контрольным образцом;
    — контаминация продуктами предшествующий амплификации (ампликонами), которые могут загрязнять исследуемые образцы и растворы через аэрозоли или лабораторное оборудование.

    Массовое внедрение ПЦР диагностики по определению РНК ВГС поставило перед органами практического здравоохранения задачи перехода на новый уровень проведения лабораторных исследований. Выделение изолированных зон для осуществления основных этапов ПЦР (для подготовки проб; проведения амплификации; для учета полученных результатов); отдельный комплект для каждого этапа реакции лабораторной одежды, автоматических пипеток; существование стандартных диагностических наборов и самое главное — наличие высококвалифицированных лабораторных сотрудников позволяет снизить уровень появления ложных результатов.

    Первый стандартизированный набор для определения РНК ВГС («AmplicorTM HCV», «Roche Diagnostic Systems») изготовлен в 1993 году. За прошедшие годы наборы для выявления РНК ВГС прошли эволюцию, основной целью которой стало повышение их чувствительности и специфичности. При конструировании «Amplicor TM HCV» использовано несколько оригинальных методических приемов, позволяющих выявлять 100 и выше копий РНК ВГС в мл., а также бороться с возможными случаями контаминации образцов и растворов, применяемых в наборе. Использование фермента — амперазы и дезиксиуридинтрифосфата (dUTP) позволяет разрушать в первом цикле амплификации предшествующие апликоны, которыми могла произойти контаминация. Разрушение амперазы в конце первого цикла амплификации (при +55 С) не позволяет ферменту разрушать ампликоны, избранные в качестве мишени. Принципиальным новшеством стало введение внутреннего контроля. Смысл этого новшества заключается во введении в каждый исследуемый образец последовательности, подобной амплифицируемому участку РНК ВГС, которая в дальнейшем выявляется с помощью соответствующих праймеров в реакции амплификации в аналогичном режиме. Отсутствие позитивной реакции при выявлении внутреннего контроля свидетельствует о наличии ложнонегативного результата реакции на наличие РНК ВГС в исследуемом образце. Диагностикумом следующего поколения стал препарат, обозначенный — «HCV Amplicor 2,0», при использовании обладающий пределом чувствительностью 50 молекул РНК ВГС.

    Систему выявления РНК ВГС при помощи наборов фирмы «Roche» нельзя рассматривать в отрыве от их приборного обеспечения, определяющего высокое качество тестирования. Разработчики метода стремились к полной автоматизации всех этапов реакции. Воплощением этой идеи стала система «COBASAmpliPrepTM», позволяющая полностью автоматизировать процесс выделения РНК ВГС, амплификации и детекции, тем самым уменьшить риск получения ложнопозитивных и ложнонегативных результатов, сохранив при этом высокую чувствительность и специфичность [41].

    Лигазная цепная реакция выявления РНК BГC.(LCR). Метод основан на способности фермента «ДНК- зависимой ДНК-лигазы» сшивать (лигировать) разрывы фосфодиэфирной связи в ДНК в присутствии АТФ и ионов Mg 2+. Так же как и при проведении «классической» ПЦР для выявления РНК ВГС, первый этап LCR — обратная транскрипция с получением кДНК ВГС. Далее ДНК-лигаза осуществляет связывание двух пар праймеров (комплементарных 5′ некодированной зоне РНК ВГС), которые в дальнейшем амплифицируются. Детекция продуктов амплификации LCR осуществляется при помощи учета реакции антиген-антитело. Каждый из двух прайеров метится различным гаптеном. Первый из них захватывается антителами, адсорбированными на микрочастицах. После процедуры промывания при помощи второй пары антител, меченных флуоресцентной меткой, происходит их избирательное взаимодействие с гаптеном в амплификационном продукте с последующим проведением субстратной реакции и учетом на флюориметре.

    Чувствительность этого метода составляет около 200 копий РНК ВГС в мл, что позволяет его использовать для решения различных клинико-диагностических задач [42]. В настоящее время диагностические наборы выявления РНК ВГС, основанные на LCR, изготовлены фирмой «Abbott».

    Nucleic Acids Seaquencence Amplification — NASBA —метод детекции РНК ВГС основан на одновременном действии трех ферментов: обратной транскриптазы вируса миелобластомы птиц, РНК-азы Н и РНК-полимеразы Т7 [43.]. В отличие от RT PCR на первом этапе не проводится обратная транскрипция РНК ВГС. При помощи использованных ферментов удается получить более 10(9) копий участка кДНК ВГС в течение 90 минут [44]. Возможность проведения реакции при небольших температурах (+41 С) значительно упрощает работу и позволяет отказаться от оборудования, обеспечивающего циклические изменения высоких температур. Учет результатов реакции осуществляется при помощи электрохемилюминесценции. Несмотря на то, что по своей чувствительности NASBA близка к RT PCR, метод широко не используется для выявления РНК ВГС. В настоящее время проводится разработка варианта метода, сочетающего принципы проведения NASBA и «Real-time RT PCR».

    Метод транскрипционно опосредованной амплификации (Transcription-mediated amplification — ТМА) отличается от ПЦР и LCR прежде всего тем, что непосредственно амплифицируются фрагменты РНК ВГС , а не кДНК ВГС. На начальном этапе реакции к РНК ВГС присоединяется праймер (№1) и с помощью фермента (обратной транскриптазы) синтезируется копия молекулы мишени — кДНК. Обратная транскриптаза, обладая также активностью РНКазы-Н, разрушает вирусную РНК в гибриде РНК-кДНК. Далее к молекуле кДНК присоединяется второй праймер с последующей достройкой двухцепочечной ДНК при помощи обратной транскриптазы. При помощи другого фермента -РНК-полимеразы происходит транскрипция РНК с кДНК, что приводит к образованию от 100 до 1000 копий ампликона РНК ВГС в одном цикле реакции. К этим РНК-апликонам присоединяется праймер № 2 с дальнейшим синтезом кДНК-копий и разрушением молекулы РНК. Присоединение праймера №1 на кДНК с последующей достройкой двухцепочечной ДНК запускает следующий цикл амплификации. Учет результатов реакции осуществляют на люменометре, так как образовавшиеся РНК-ампликоны специфически взаимодействуют с ДНК-зондами, меченными хемилюминафорами.

    В качестве преимуществ ТМА-метода при выявление РНК ВГС отмечают:

  • проведение реакции при более низких температурах по сравнению с ПЦР;
  • образование большего числа ампликонов в одном цикле реакции, что уменьшает время, необходимое для получения конечного результата (30-40 минут), и повышает чувствительность реакции (50 копий /мл.) [45].
  • снижение риска контаминации, так как РНК менее устойчива, чем ДНК.

    Сравнительные исследования по детекции РНК ВГС при помощи ТМА и другими методами продемонстрировали высокий уровень совпадений результатов [45].

    Сочетание принципов гибридизации и амплификации лежит в основе метода выявления РНК ВГС, обозначенного как «Метод гибридизации с использованием разветвленных зондов или Branched DNA assay (bDNA) [46]. В отличие от ПЦР в данном тесте осуществляется амплификация не молекул кДНК ВГС, а сигнала. Реакция проводится в 96 луночных планшетах, на которых адсорбированы фрагменты РНК ВГС из 5′ нетранслируемой зоны и core-гена РНК ВГС. За счет последующего связывания с синтетической молекулой разветвленной ДНК и гибридизацией с пробой, меченной щелочной фосфотазой с усилителем и последующей ферментативной реакцией достигается резкое увеличение полученного сигнала. В настоящее время на диагностическом рынке появились диагностикумы третьего поколения (Вауег 3.0 Hepati-tis С Virus RNA Quantitation by bRNА), обладающие чувствительностью, позволяющей выявлять 520 IU/ml (2500 копий РНК ВГС).

    КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ВЫЯВЛЕНИЕ РНК ВГС. Для оценки концентрации РНК ВГС применяют количественный вариант ПЦР. Первоначально концентрацию РНК ВГС пытались охарактеризовать порядковыми величинами, например»+»,»++» и т.д., визуально отражающими интенсивность полос, полученных при электрофорезе продуктов амплификации, или же методом конечных разведений, т.е по наличию позитивного результата в конечной точке титрования. Трудности стандартизации всех этапов ПЦР не позволяют объективно оценить концентрацию РНК ВГС, что приводит к существенным ошибкам трактовки полученных результатов.

    В настоящее время результаты исследования выражают в количественных единицах: количество копий РНК ВГС, содержащихся в 1 мл., в абсолютном или логарифметическом выражении (log 10). Исходя из того, что концентрация обнаруженной РНК ВГС отражает количество вирусных частиц, данный показатель обозначают как «вирусный эквивалент (eq)», с добавлением приставки k (килограмм, тысяча) или М (миллион). Еще одним способом выражения количества вирусных частиц являются их весовые эквиваленты. Например, в граммах или пикограммах (1 pg соответствует приблизительно 1 миллиону eq). Разнообразие применяемых величин создает трудности трактовки результатов, полученных в различных лабораториях. Поэтому комитет экспертов ВОЗ по биологической стандартизации изготовил «международный стандартный образец», содержащий РНК ВГС (лиофильновысушенная сыворотка крови, содержащая РНК ВГС 1-го генотипа), концентрация которой выражена в международных единицах (IU/mL) [47]. Специальные коэффициенты позволяют пересчитывать полученные показатели концентрации в международные единицы.

    Для определения концентрации РНК ВГС применяют практически все варианты ПЦР. При этом к диагностическим препаратам предъявляется ряд специфических требований, важнейшим из которых является строгая линейность результатов, т.е. увеличение сигнала регистрируемой реакции при увеличении концентрации РНК ВГС в исследуемом образце. Применение внутренних стандартов с различным содержанием РНК ВГС позволяет избежать многих методических ошибок, которые могут отразиться на конечном результате реакции [28]. Чувствительность применяемых диагностикумов (Amplicor HCV Monitor v2.0; LCx HCV RNA Quantitative Assay) позволяет выявлять РНК ВГС, начиная с 50 копий в мл [48,49], что особенно важно для прогнозирования эффективности избранной противовирусной терапии.

    ПЦР в реальном времени («Real-time RT PCR») —один из наиболее перспективных вариантов количественного метода выявления РНК ВГС. Метод и его аппаратное обеспечение совместно разработаны специалистами фирм «Roche» и «Percin Elmer». Принцип метода заключается в способности гидролизовать последовательности кДНК в направлении 5′—- 3′. В реакции применяется специальный зонд, меченный двумя флюоресцентными красителями, имеющими близкие максимумы поглощения и флюоресценции. При наличии продуктов амплификации Tag-полимераза расщепляет зонд, что приводит к предотвращению переноса энергии от одной молекулы красителя к другой, и тем самым предотвращает выход кванта света. Специальный прибор осуществляет учет реакции и математическое моделирование кинетики флюоресценции на каждом этапе реакции, что позволяет получить информацию об исходной концентрации РНК ВГС.

    Отличительной особенностью «ПЦР в реальном времени» считают возможность получать информацию о наличии РНК ВГС непосредственно в процессе реакции, что позволяет уменьшить время анализа в сочетании с высокой чувствительностью и линейностью получаемых результатов [50]. По данным Татьяны Яшиной с соавторами, данный метод позволяет выявлять от 200 копий РНК ВГС в мл. [51].

    МЕТОДЫ ГЕНОТИПИРОВАНИЯ РНК ВГС. Определение принадлежности ВГС к определенному генотипу и субтипу нашло свое применение для решения не только чисто научных, но и практических вопросов. Например: поиск источника инфекции во время вспышек гепатита С или прогнозирование эффективности применяемой терапии.

    «Золотой стандарт» генотипирования ВГС — непосредственное определение первичной структуры РНК ВГС с его последующим филогенетическим анализом [52], что позволяет четко охарактеризовать данный изолят вируса. Получить эту информацию возможно при использовании следующих вариантов секвенирования:

  • прямого;
  • на основе стандартного клонирования;
  • секвенирования продуктов ПЦР реакции (Limited-sequencing).
    Несмотря на точность получаемого результата, метод непосредственного секвенирования не используется в практическом здравоохранении из-за технических сложностей проведения исследования и высокой стоимости работ. Вместе с тем наличие информации о первичной структуре РНК ВГС является референтным методом генотипирования, а наличие приборов для автоматического секвинирования упрощает получение результата.

    В настоящее время в большинстве случаев для генотипирования РНК ВГС применяются методы, основанные на использовании ПЦР с типоспецифическими праймерами. Впервые генотипирование РНК ВГС проведено Н. Okamoto с соавторами в 1992 году при помощи RT-ПЦР [53], включающего два этапа амплификации. Первый из них проводился с универсальными, для всех генотипов ВГС, праймерами, второй со смесью типоспецифических праймеров с получением специфических продуктов амплификации различной длины. О наличии того или иного генотипа судили по размеру амплифицированного продукта. В качестве праймеров используются типоспецифические зонды, информация о которых расположена в 5’UTR, Core или NS5 — областях РНКВГС[54].

    Гибридизация амплифицированных продуктов с адсорбированными геноспецифическими зондами (из 5′-нетранслируемой зоны РНК ВГС), адсорбированными на нитроцеллюлозной мембране, лежит в основе теста — обозначенного «INNO-LiPA HCV, INNO-GENETICS» [55]. Первоначально с помощью этого теста удавалось типировать генотипы: la; lb; 2a; 2b;3a; 3Ь; 4 и 5а. В дальнейшем тест-системы 2-го поколения «INNO-LiPA HCV II , INNOGENETICS» позволяют различать все 6 генотипов и дополнительно 2с; 2d; 2i; 3с; 4a-h; 6а и 10а. [56]

    Методический арсенал определения генотипов ВГС не ограничивается вышеперечисленными способами и включает в себя разнообразные методы:

  • генотипирование на основе анализа профилей рестрикции амплифицированных продуктов (RFLP). Продукты амплификации фрагментов РНК ВГС (5’UTR — область или NS5 область РНК ВГС) расщепляются рестриктазами. Образовавшиеся фрагменты различаются по длине в зависимости от имеющихся внутри них сайтов рестрикции, по которым идет расщепление. Результаты электрофореза и их сравнение позволяют идентифицировать генотип ВГС в исследуемом образце [57]. Сравнение результатов генотипирования методом ПЦР- RFLP с данными секвинирования продемонстрировало высокий уровень совпадения результатов — 95% [58].
  • генотипирование на основе метода SSCP (оценки конформационного полиморфизма одноцепочечных фрагментов ДНК). В качестве объекта исследования выбран 5′-нетранслируемый регион РНК ВГС, который обладает минимальным набором нуклеотидных вариаций, отличающих генотипы друг от друга. Этот факт определяет возможность применить общие праймеры при генотипировании [59].

    СЕРОТИПИРОВАНИЕ Анти-ВГС стало возможным благодаря исследованиям P.Simmonds с соавторами, установившим наличие антител, направленных к генотипспецифичным эпитопам, информация о которых кодирована NS4 зоной РНК ВГС [60]. При помощи диагностикума для ИФА, сконструированного на основе синтетических пептидов, удалось разграничить случаи гепатита С, вызванные вирусами 1, 2 и 3 генотипа (89% совпадения с результатами генотипирования). Разработка тестсистем с использованием синтетических и рекомбинантных антигенов, кодированных NS4 и Core зонами РНК ВГС, позволила расширить перечень типируемых вариантов вируса, а также судить о наличии подтипов (1а, lb, 2a, 2Ь, За, и 4а) [61,62]. В настоящее время осуществляется коммерческий выпуск диагностических препаратов для проведения серотипирования как в плашечном варианте проведения ИФА — «Мurех НС 1-6 Serotyping Assay, Murex Diagnostics», так и в варианте «иммуноблот» — RIBA HCV Serotyping Assay, Chiron Diagnostics. Сравнительные данные результатов серотипирования и генотипирования РНК ВГС продемонстрировали высокий уровень совпадения результатов, достигая 95% [62].

    Серотипирование анти- ВГС по сравнению с генотипированием РНК ВГС обладает такими преимуществами, как простота проведения реакции и более низкая стоимость. Вместе с тем, этот метод ни в коем случае не может заменить генотипирование. Результаты серотипирования анти-ВГС свидетельствуют о типовой принадлежности анти-ВГС при текущей или ранее перенесенной инфекции. В некоторых случаях (наиболее часто у больных гемофилией) регистрируется одновременное выявление анти-ВГС различных подтипов, что может свидетельствовать о множественном инфицировании различными субтипами и генотипами ВГС [63]. Кроме того, у пациентов с гепатитом С на фоне выраженного иммунодефицитного состояния РНК могут быть единственным маркером, что делает невозможным проведение серотипирования.

    ВЫЯВЛЕНИЕ и ТРАКТОВКА РЕЗУЛЬТАТОВ ТЕСТИРОВАНИЯ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ВГС-ИНФЕКЦИИ. Наличие широкого спектра серологических маркеров текущей или предшествующей ВГС инфекции, а также современная методологическая база позволяют решить многие задачи лабораторной диагностики и профилактики гепатита С. В таблице № 2 представлены серологические маркеры ВГС инфекции и наиболее важные направления их тестирования.

    Таблица 2
    Диагностическая значимость маркеров текущей или предшествующей ВГС инфекции

    Скрининг
    в службе
    крови

    Подтвер-
    ждение
    результата
    + анти-ВГС

    Одной из главных задач лабораторной диагностики гепатита С является постановка диагноза и разграничение острого от хронического гепатита С при помощи выявления серологических маркеров инфицирования. Так же как и при других острых вирусных гепатитах, серологические маркеры инфицирования ВГС последовательно появляются и исчезают по ходу инфекции и процесса выздоровления (Рисунок 2).

    РНК ВГС удается обнаружить на 7 — 21-й день после инфицирования ВГС, а анти-ВГС на 20 — 150-й день (в среднем 50-й день) [64]. Спектр анти-ВГС может различаться в зависимости от периода острого гепатита. Считается, что первыми удается определить антитела, кодированные Core и NS5 зоной РНК ВГС. Анти-ВГС к белкам, кодированным NS4 зоной, в острую фазу гепатита С отсутствуют [65]. Сравнительное изучение уровня концентраций анти-ВГС, спектра анти-ВГС и РНК ВГС у больных острым и хроническим гепатитом продемонстрировало некоторые различия [66]. На наш взгляд, эти различия могут быть связаны с индивидуальными особенностями инфекционного процесса, что снижает их диагностическую ценность.

    Рис. 2. Острый гепатит С

    По аналогии с лабораторной диагностикой гепатита А и В ожидали, что определение антител к ВГС класса IgM будут иметь столь же большое диагностическое значение как IgM анти-ВГА и IgM анти-НВс. Однако данные тестирования сывороток крови больных острым и хроническим гепатитом С на наличие IgM анти-ВГС указывают на частое их выявление среди этих больных — 50-93% и 50-70% соответственно [67,68], эти результаты свидетельствуют, что обнаружение IgM анти-ВГС не может быть использовано как маркер острой ВГС инфекции.

    Отсутствие маркера, претендующего на роль «золотого» стандарта острого гепатита С, определяет необходимость комплексной оценки полученных результатов, основанных на динамическом наблюдении за пациентом.

    Не менее важное направление использования высокочувствительных методов тестирования РНК ВГС снижение риска развития посттрансфузионного гепатита С. Необходимость таких работ определяется наличием фазы «окна», т.е. временем между первым обнаружением РНК ВГС и появлением анти-ВГС , а также существованием доноров крови (больных хроническим гепатитом С), у которых имеются РНК ВГС при отсутствии анти-ВГС. Современная система контроля донорской крови на наличие ВГС включает только тестирование анти-ВГС, риск заражения гепатитом С сохраняется. Исходя из этого правомерна постановка вопроса о тестировании крови на наличие РНК ВГС современными методами (методы NAT — «nucleic acid amplification test»). Фактор, ограничивающий эту работу, — высокая цена исследований. Для сокращения затрат рекомендуется тестирование пулов сывороток крови (от 8 до 96 образцов) с последующим поиском позитивного образца в случае выявления РНК ВГС в пуле сывороток. Учитывая фактор разведения искомой РНК ВГС при пулировании сывороток крови, принципиальным становится вопрос о применении наиболее чувствительных методов детекции. Считается, что использование диагностических наборов для NAT — с чувствительностью 50-100 IU/mL позволяет значительно уменьшить риск посттрансфузионного гепатита С.

    Несомненно, перечень вопросов, которые можно решить при тестировании всего спектра маркеров ВГС-инфекции, не исчерпывается этими двумя направлениями. Наличие современных методов тестирования в совокупности со знанием их возможностей открывает широкие перспективы научных и прикладных работ по гепатиту С.

    Еще по теме:

    • Первичный туберкулез виды Конспект лекций по туберкулезу (Е. С. Мостовая, 2009) В данном издании подробно изложена современная информация о причинах возникновения, механизмах развития туберкулеза. Описаны основные клинические формы и методы диагностики, […]
    • Грипп этиотропная терапия Грипп этиотропная терапия 200 мг 1 раз в день При осложненных формах гриппа назначается Арбидол курсом 5 дней вместе с гамма-глобулином. В НИИ гриппа РАМН для лечения и профилактики гриппа создан для детей в возрасте старше 1 года […]
    • Вирусная нагрузка при гепатите c Вирусная нагрузка при гепатите c Вопрос: У меня ХГ(уже 25лет). билируб макс был 30, АЛТиАСТ-2. После леч норм-лась. Но при обсл-ии выявлен-гепатитС: Core–рег 2,398 пол; NS-рег–2,355пол-ый; H pylori CagAIg A,M,G– отр; HCV […]
    • Функции лечения туберкулеза Областное государственное автономное учреждение здравоохранения «Томский фтизиопульмонологический медицинский центр» Заведующий отделением: Щегерцов Дмитрий Юрьевич Контактная информация: Тел.: (3822) 911-355 Старшая медсестра: […]
    • Средство от гриппа для детей до 2 лет Профилактика гриппа у детей Вниманию родителей Заболеваемость гриппом и ОРВИ среди детей ежегодно в 4-5 раз выше, чем среди взрослых. Это объясняется возрастным несовершенством иммунных и анатомо-физиологических механизмов, […]
    • Климактерический синдром этиология Как проявляется климактерический синдром и как облегчить его течение? Климактерический синдром представляет собой патологическое состояние, связанное с климактерическим периодом, осложняющее его течение и характеризующееся […]