Микобактерии туберкулеза в крови

Обнаружение микобактерий туберкулеза (M. tuberculosis – M. bovis complex) (в крови; моче; мокроте; мазке из зева; ПЦР)

Ключевые слова: микобактерия палочка Коха микобактериальная инфекция туберкулезный комплекс МБТ

Обнаружение микобактерий туберкулеза (M. Tuberculosis — M. bovis complex) в биологических жидкостях (крови, моче, мокроте, плевральной жидкости) — показатель инфицирования микобактериями туберкулеза. Определяется методом обнаружения ДНК в полимеразной цепной реакции (ПЦР). Основные показания к применению: диагностика туберкулеза различной локализации, контроль за лечением.

Выявление микобактерий туберкулеза методом ПЦР является перспективным способом диагностики инфицирования, поскольку тест имеет высокую чувствительность и специфичность и позволяет использовать разнообразный биологический материал. Считается, что для обнаружения ДНК достаточно 10 микобактерий в исследуемом образце. Микробиологические способы диагностики длятся в течение нескольких недель (4-8 недель или на высокоселективных средах с течение 2-х недель) и обладают низкой чувствительностью. Следует учитывать, что в настоящее время ПЦР анализ не заменяет использование бактериологического метода. Одновременное использование серологических методов диагностики и ПЦР позволяют быстрее проводить исследование и контролировать эффективность лечения.

Туберкулез вызывается микобактериями туберкулеза и передается от инфекционного источника по воздуху к другим людям, предрасположенным к этому заболеванию. При кашле или чихании, частицы (1 — 5 микрон),содержащие микобактерии, распыляются в воздухе. Они могут оставаться в воздухе в течение нескольких часов. При вдыхании другим человеком часть частиц оседает в верхних дыхательных путях, некоторые частицы проникают и в нижние отделы легких. Первоначально, туберкулезные палочки размножаются в альвеолярных макрофагах. Некоторое количество бактерий распространяется через лимфатические пути к регионарным лимфатическим узлам и по кровеносным сосудам к другим органам. В течение нескольких недель иммунная система способна приостанавливать размножение туберкулезных палочек. В это время, большинство инфицированных людей имеет положительную реакцию на туберкулиновый тест. Туберкулез может развиться как болезнь, когда туберкулезные палочки начинают размножаться. Люди с иммунносупрессией (ослабленным иммунитетом) наиболее подвержены риску заболеть туберкулезом. Всего известно около 70 видов микобактерий, но только 5 из них вызывают заболевание туберкулезом, которые объединяются в туберкулезный комплекс — M.tuberculosis complex:

  1. 1. M.tuberculosis humanus (M.tuberculosis) — человеческий тип, вызывающий до 85% случаев туберкулеза (по другим данным до 92 %).
  2. 2. M.tuberculosis bovinus (M.bovis) — бычий тип, вызывающий 10-15% случаев туберкулеза (по другим данным до 5%).
  3. 3. M.tuberculosis africanus (M.africanus) — африканский тип, вызывающий до 90% случаев туберкулеза в Южной Африке.
  4. 4. M.tuberculosis microti (M. microti) — мышиный тип, редко вызывает заболевание.
  5. 5. M.tuberculosis bovinus (M. bovis BCG) — вакцинный штамм, применяющийся для специфической профилактики от туберкулеза.

Существует целый ряд условно-патогенных нетуберкулезных микобактерий (НТМБ), в частности относящихся к комплексу MAIS (M. avium, intracellulare, M. scrofulaceum), которые могут вызвать микобактериозы, определяемые как «болезнь компрометированного хозяина».

Наиболее чато при туберкулезе поражаются легкие (около 85% всех случаев туберкулеза). Туберкулез может вызывать также поражение костей, почек, лимфатической системы, мочеполовой системы, центральной нервной системы. Внелегочный туберкулез часто обнаруживается у ВИЧ-инфицированных пациентов.

Специфичность определения составляет 98%, чувствительность определения не менее 80 днк-копий в 5 мкл прошедшей обработку (выделение ДНК) пробе.

Mycobacterium tuberculosis (туберкулёз), ДНК (ПЦР), качественный, кровь

Специальной подготовки не требуется

Исследуемый материал: Взятие крови

Туберкулез (от лат. tuberculum – «бугорок») – специфическое инфекционное заболевание человека и животных, которое передаётся преимущественно воздушно-капельно. Риск заражения вырастает в связи с понижением иммунитета, вызванным ВИЧ/СПИДом, хроническими заболеванием почек, диабетом, беременностью, старением, пересадкой органов и связанным с этим приёмом подавляющих иммунитет препаратов. Кроме этого, более подвержены заболеванию дети до 5 лет после виража туберкулиновой пробы и те, кто имеет контакт с больными туберкулезом. К самым уязвимым группам населения относятся бездомные, заключенные, наркоманы, а также пожилые люди.

Туберкулез человека и животных вызывают несколько близкородственных видов микобактерий. Чаще всего возбудителем туберкулеза у человека является вид Mycobacterium tuberculosis.

Бактериемия, или попадание микобактерий в кровь пациента может происходить как на ранних стадиях инфицирования туберкулезом, так и при развитии внелегочного, или генерализованного туберкулеза. Бактериемия опасна тем, что иммунный ответ организма на бактерии может привести к сепсису и септическому шоку, вплоть до летального исхода. Наиболее высокий риск перехода туберкулезной инфекции в генерализованную форму у пациентов с поздними стадиями ВИЧ, у прервавших противотуберкулезное лечение, и у тех, кто не обратился своевременно за медицинской помощью при появлении клинических проявлений туберкулеза.

После выявления возбудителя туберкулеза необходимо провести обследование на чувствительность обнаруженных микобактерий к противотуберкулезным препаратам. Данная процедура очень важна для назначения адекватной терапии заболевания.

Данный анализ позволяет определить наличие ДНК микобактерий туберкулеза человеческого типа — Mycobacterium tuberculosisв крови. Анализ помогает в диагностике туберкулёза.

Метод ПЦР – полимеразная цепная реакция, позволяющая идентифицировать наличие в биологическом материале искомый участок генетического материала.
Подробнее о методе ПЦР — его разновидностях, преимуществах и области применения в медицинской диагностике.

Референсные значения — норма
(Mycobacterium tuberculosis (туберкулёз), ДНК (ПЦР), качественный, кровь)

Информация, касающаяся референсных значений показателей, а также сам состав входящих в анализ показателей может несколько отличаться в зависимости от лаборатории!

В норме результат отрицательный, то есть ДНК Mycobacterium tuberculosis в крови отсутствует.

№341СВ, Микобактерии туберкулеза, определение ДНК (Mycobacterium tuberculosis, DNA) в сыворотке крови

Определение ДНК возбудителей туберкулеза, комплекса микобактерий: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum в сыворотке крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».

Туберкулёз (от лат. tuberculum — бугорок) – распространённое, социально зависимое заболевание человека. Болеют им и животные. Возбудитель туберкулёза открыт Р. Кохом в 1882 г. Это кислотоустойчивые аэробные бактерии (74 вида) рода Мycobacterium, широко распространённые в почве, воде и у животных. У человека чаще всего возбудителем является Mycobacterium tuberculosis. Второй по частоте является Mycobacterium bovis. Оба вида очень устойчивы ко многим факторам внешней среды, а в организме очень долго остаются жизнеспособными и могут вызвать заболевание через многие годы после заражения. Очень важно, что микобактерии туберкулёза могут образовывать так называемые L-формы. Сохраняясь в организме, они создают противотуберкулёзный иммунитет.

Длительное время туберкулёз может протекать скрыто и обнаруживаться случайно, хотя нередко уже проявляются такие симптомы, как слабость, быстрая утомляемость, субфебрильная температура, ночная потливость, а в крови – анемия и лейкопения. В настоящее время, несмотря на все достижения антимикробной терапии, туберкулёз угрожает будущему нации. Поэтому все методы диагностики, особенно его латентных форм являются крайне важными.

Существует много методов лабораторной диагностики туберкулёза: микроскопия мазка (чаще всего для этого используют мокроту), классический культуральный метод, ИФА. Всем им присущи достоинства, но и определённые недостатки, в частности, обнаружение микобактерий только в случае их достаточного количества.

В последние годы для диагностики используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Её высокая чувствительность позволяет обнаружить в исследуемом материале единичные клетки и даже их фрагменты ДНК. Метод исключает перекрёстные реакции и специфичность достигает 100%. ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.

Аналитические показатели:

  • определяемый фрагмент — специфичные участки ДНК микобактерий;
  • специфичность определения — 100%;
  • чувствительность определения- 100 копий ДНК микобактерий в образце.
  • Лихорадка, характеризующаяся ежедневным двойным повышением и понижением температуры тела. На фоне туберкулиновой гиперчувствительности или туберкулиновой анергии.
  • Острые воспалительные заболевания верхних и нижних дыхательных путей с длительным контактом с туберкулёзным больным в анамнезе.
  • Ненормальная реакция на туберкулиновую пробу (гиперчувствительность или анергия) на фоне обострения какого-либо системного заболевания.
  • Подозрение на системную волчанку.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Тест качественный. Результат выдаётся в терминах «обнаружено» или «не обнаружено».

  • «обнаружено»: в анализируемом образце обнаружены специфичные для микобактерий фрагменты ДНК, инфицирование микобактериями;
  • «не обнаружено»: в анализируемом образце не обнаружены специфичные для микобактерий фрагменты ДНК или концентрация возбудителя в образце ниже границы чувствительности теста.

Обращаем внимание , что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.

Кровь на микобактерии туберкулеза

Идея ПЦР основана на том, что ген можно размножить в пробирке, увеличивая количество его копий в миллионы раз. Механизм ПЦР заключается в синтезе in vitro коротких нуклеотидных последовательностей для последующего анализа. Для проведения ПЦР нужны пара олигонуклеотидов (праймеров), комплементарных исследуемому фрагменту, и фермент ДНК-полимераза. В определенных условиях праймеры способны распознавать гомологичные последовательности в денатурированной ДНК, связываться с ними и служить затравкой для ферментативного синтеза копий участка изучаемого гена. Каждый цикл синтеза удваивает число копий фрагмента-мишени, т.е. количество продукта (амплификата) в процессе ПЦР нарастает в геометрической прогрессии. 25-35 циклов реакции дают достаточно амплификата для дальнейшего изучения даже из единичного фрагмента ДНК. В течение нескольких часов с помощью ПЦР из одного фрагмента молекулы ДНК можно получить более 50 млрд. идентичных молекул. Таким образом, можно изучить генетический материал, присутствующий в изучаемом образце в минимальных количествах.

Метод ПЦР теоретически позволяет обнаружить даже 1 копию ДНК в образце, не имея, таким образом, предела чувствительности. Еще одно преимущество ПЦР заключается в том, что для нее характерна не только абсолютная чувствительность, но и абсолютная специфичность. ПЦР не дает ложноположительных результатов, при условии, что метод выполняется правильно.

ПЦР-метод является не заменой традиционных морфологических, биохимических или иммунологических методик, но их существенным и необходимым дополнением. Опыт организации и работы ПЦР-лабораторий в ряде экспертных и санитарно-эпидемиологических учреждений показывает, что, несмотря на первоначальные затраты и накладные расходы, медико-экономический эффект настолько значителен, что позволяет проводить научно-методическую и просветительскую работу, значительно повысив уровень санитарно-эпидемиологической безопасности на территории России.

В настоящее время в практическое здравоохранение внедряется новая технология ПЦР — ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR). Ее принципиальной особенностью является мониторинг и количественный анализ накопления продуктов ПЦР и автоматическая регистрация и интерпретация полученных результатов. ПЦР в реальном времени не требует стадии электрофореза, что позволяет снизить требования, предъявляемые к ПЦР лаборатории.

Преимущества метода ПЦР (PCR)

Метод ПЦР (метод полимеразной цепной реакции, PCR, polymerase chain reaction) является одним из наиболее надежных молекулярно-диагностических методов (объектом исследования которых являются ген или фрагмент гена). Подробнее о методе ПЦР >>>.

Основные достоинства метода ПЦР:
1.Прямое определение ДНК (РНК) возбудителя (в отличие от метода ПЦР, метод иммуноферментного анализа дает опосредованное свидетельство наличия инфекции).
2.Высокая специфичность.
3.Высокая чувствительность. Метод позволяет выявлять единичные копии ДНК бактериальных клеток или вирусов, т.е. определять наличие возбудителя в первые дни заражения, что имеет особое значение в практике переливания крови.
4.Универсальность процедуры.
5.Простота и удобство проведения анализа.
6.Сравнительно небольшие затраты времени на проведение анализа.
7.Умеренная и постоянно снижающаяся себестоимость.
Метод ПЦР (метод полимеразной цепной реакции, PCR, polymerase chain reaction) является одним из наиболее надежных молекулярно-диагностических методов (объектом исследования которых являются ген или фрагмент гена). Подробнее о методе ПЦР >>>.

Основные достоинства метода ПЦР:
Прямое определение ДНК (РНК) возбудителя (в отличие от метода ПЦР, метод иммуноферментного анализа дает опосредованное свидетельство наличия инфекции).
Высокая специфичность.
Высокая чувствительность. Метод позволяет выявлять единичные копии ДНК бактериальных клеток или вирусов, т.е. определять наличие возбудителя в первые дни заражения, что имеет особое значение в практике переливания крови.
Универсальность процедуры.
Простота и удобство проведения анализа.
Сравнительно небольшие затраты времени на проведение анализа.
Умеренная и постоянно снижающаяся себестоимость.

ПЦР в реальном времени

В настоящее время в практическое здравоохранение внедряется новая технология ПЦР — ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR). Ее принципиальной особенностью является мониторинг и количественный анализ накопления продуктов полимеразной цепной реакции и автоматическая регистрация и интерпретация полученных результатов. Этот метод не требует стадии электрофореза, что позволяет снизить требования, предъявляемые к ПЦР лаборатории. Благодаря экономии производственных площадей, уменьшению количества персонала и востребованности количественного определения ДНК/РНК этот метод в последние годы успешно применяется в крупнейших санитарно-эпидемических, диагностических и научно-исследовательских центрах развитых стран мира, замещая ПЦР в ее сегодняшнем («классическом») формате.
ПЦР в реальном времени использует флуоресцентно меченые олигонуклеотидные зонды для детекции ДНК в процессе ее амплификации. ПЦР в реальном времени позволяет провести полный анализ пробы в течение 20-60 мин и теоретически способен детектировать даже одну молекулу ДНК или РНК в пробе.

Как работает ПЦР в реальном времени c использованием TaqMan-зондов
ПЦР в реальном времени использует TaqMan систему, контролирующую кинетику ПЦР непосредственно в ходе амплификации с использованием резонансного тушения флуоресценции. Для детекции используется зонд, несущий флуорофор и тушитель, комплементарный средней части амплифицируемого фрагмента. Когда флуорофор и тушитель связаны с олигонуклеотидным зондом, наблюдается лишь незначительная флуоресцентная эмиссия. Во время процесса амплификации за счет 5′-экзонуклеазной активности Taq-полимеразы флуоресцентная метка переходит в раствор, освобождаясь от соседства с тушителем, и генерирует флуоресцентный сигнал, усиливающийся в реальном времени пропорционально накоплению амплификата.

ПЦР лаборатория для
определения трансгенных организмов

Благодаря своим достоинствам, метод ПЦР широко применяется для диагностики вирусных и бактериальных инфекций, наследственных и онкологических заболеваний, для HLA-типирования, в судебной медицине, для определения отцовства и идентификации личности, в эпидемиологии, в генетике, в биотехнологии (трансгенные животные, растения, микроорганизмы), в области сертификации пищевого сырья и продуктов питания.

Широкое использование молекулярно-биологических методов в пищевой промышленности обусловлено появлением новых законов в системе российского законодательства, вводящих молекулярно-биологический анализ и идентификацию трансгенных вставок в геном сельскохозяйственных растений и иных генетически-модифицированных организмов, как обязательную составную часть процесса сертификации соответствующих пищевых и сырьевых товаров.

Квантифероновый тест (диагностика туберкулеза)

Внимание! С 7 июня 2016 г. по техническим причинам исследование временно не выполняется.

КВАНТИФЕРОНОВЫЙ ТЕСТ (QuantiFERON®-ТВ Gold) – современный лабораторный тест для выявления туберкулезной инфекции, альтернатива классическому кожному тесту с туберкулином. В настоящий момент в различных странах разработано и выпущено большое число национальных рекомендаций по применению данного теста.

Квантифероновый тест основан на определении INF-γ (гамма-интерферона), высвобождаемого сенсибилизированными Т-клетками, стимулированными in vitro специфическими протеинами (ESAT-6, CFP-10, TB7.7 (p4)) микобактерий туберкулеза, входящих в комплекс Mycobacterium tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. canettii, M. caprae, M. pinnipedii, M. mungi, M. microti, M. africanum и др.). Эти протеины отсутствуют в вакцинных штаммах M. bovis BCG и в большинстве нетуберкулезных микобактерий, за исключением M. kansasii, M. szulagai, M. marinum.

В исследуемой крови пациента (из пробирки с ТВ-антигеном) определяется содержание INFγ, результат анализируется в совокупности с данными, полученными из 2-х других пробирок (выполняющих роль контрольных).

Примерно 1/3 часть населения мира инфицирована МБТ, и только у 5-10% инфицированных лиц развивается заболевание. При наличии неблагоприятных факторов латентная туберкулезаня инфекция (ЛТИ – состояние, когда микобактерии туберкулеза (МБТ) присутствуют в организме человека, но при этом отсутствуют клинические и рентгенологические признаки туберкулеза) может перейти в активную форму с развитием внелегочного туберкулеза (например, туберкулез почек).

К группе высокого риска инфицирования МБТ относятся лица, имевшие контакт с больным туберкулезом, или имеющие высокую вероятность контакта (работники противотуберкулезных диспансеров, приютов, исправительных учреждений и др.), а также лица с сопутствующими заболеваниями (ВИЧ-инфекцией, сахарным диабетом и др.).

Используемые для диагностики ЛТИ кожные тесты – проба Манту и Диаскинтест®, имеют ряд противопоказаний и ограничений к применению.

Противопоказания к проведению пробы Манту и Диаскинтеста:

  • Индивидуальная непереносимость туберкулина;
  • Острые и хронические инфекционные заболевания и соматические заболевания в период обострения;
  • Кожные заболевания и аллергические состояния в период обострения;
  • Период карантина в детских коллективах.

У пациентов с индивидуальной гиперчувствительностью к туберкулину может наблюдаться ложноположительная реакция.

Сравнение тестов для диагностики туберкулезной инфекции

Еще по теме:

  • Анализ на туберкулез самара Обнаружение ДНК микобактерий туберкулеза (СЛЮНА, МОКРОТА, ЛИКВОР) Обнаружение микобактерий туберкулеза (M. Tuberculosis - M. bovis complex) в биологических жидкостях (крови, моче, мокроте, ликворе и пр.) - показатель инфицирования […]
  • Туберкулез формы бактерий Туберкулез Туберкулез – хроническая инфекция, вызываемая бактериями Mycobacterium tuberculosis complex. При поражении туберкулезными микобактериями чаще всего страдают органы дыхания, кроме того, встречается туберкулез костей и […]
  • Синдром сильвера рассела лечение Синдром Сильвера-Рассела (синдром Рассела-Сильвера) Для синдрома Сильвера-Рассела хара­ктерны задержка роста с рождения, асим­метрия скелета, искривление V пальцев, специфические черепно-лицевые микро­аномалии (рис. 7.1.4 на цветной […]
  • Потливость при пищевом отравлении Отравление: Первая помощь Многие думают, что пищевое отравление – пустяк. Но в некоторых случаях малейшее промедление может привести к трагедии. Как правило, пищевое отравление вызывает сочетание тошноты, рвоты и диареи, а иногда […]
  • Приказ минздрава о полиомиелите Приказ Министерства здравоохранение РФ от 21 марта 2014 г. № 125н "Об утверждении национального календаря профилактических прививок и календаря профилактических прививок по эпидемическим показаниям" В соответствии со статьями 9 и 10 […]
  • Врожденный гепатит новорожденных Способ лечения врожденного гепатита с у детей первого года жизни Владельцы патента RU 2424794: Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для лечения врожденного гепатита С у детей первого года […]