Бактериофаг от сальмонеллеза голубей

Бактериофаг от сальмонеллеза голубей

Специфическая пофилактика сальмонеллёза голубей

(Окончание. Начало в № 48.)
Среди иностранных вакцин известна вакцина Zoosal T с двойным маркерным мутантом S. typhimurium, испытанная Grund S. в Германии. При испытании она показала высокую защитную эффективность для голубей, зараженных S. typhimurium var. сopenhagen.

Во Франции против сальмонеллеза голубей применяются две аутовакцины: вакцина против сальмонеллеза голубей из 2 штаммов S. typhimurium var. copenhagen (из штамма 3506 и штамма 93155). Лечебная эффективность при введении голубям штамма S. typhimurium 93155 была выше, чем при использовании штамма S. typhimurium 3506.

Marija Popovic и др. предложили масляную сальмонеллезную вакцину для голубей, в состав которой входит S. typhimurium var. copenhagen, который часто является возбудителем сальмонеллеза голубей, и показали высокую эффективность вакцины против сальмонеллеза голубей при подкожной вакцинации в дозе 0,5-1 млн. мкр. кл., формирование стойкого иммунитета к заражению сальмонеллезом .

Милич Л.А. и Милятов Л.И. использовали против сальмонеллеза голубей формол- и термоинактивированные вакцины против паратифа голубей, более эффективной из которых оказалась термоинактивированная вакцина.

Увы, большинство описанных вакцин являются иностранными и не зарегистрированы в России. За неимением отечественных безопасных и эффективных биопрепаратов в нашу страну осуществляется нелегальный ввоз зарубежных, например, инактивированной вакцины «Сальмавир» голландского производства. Контрабандный ввоз производится, как правило, без соблюдения правил транспортировки и хранения. Результатом этого является снижение активности и отсутствие желаемого эффекта. К тому же, иностранные биопрепараты дорогостоящи и в своем составе содержат местные сероварианты, малоэффективные для борьбы с сальмонеллезом в России.

Последней разработкой является созданная в 2005 году на базе кафедры клинической диагностики и болезней молодняка Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина инактивированная вакцина против сальмонеллеза голубей, включающая выделенные от голубей наиболее иммуногенные 2 штамма S. typhimurium и 1 штамм S. enteritidis. Вакцинации подвергаются голуби с 20-дневного возраста двукратно с интервалом 30-45 дней в дозе 0,5 см3 внутримышечно, иммунитет сохраняется в течение 10-12 месяцев. Указанный препарат прошел успешные испытания на голубях, фазанах и показал высокую защитную активность, достигавшую 90-100% в «полевых» условиях.

Несмотря на наличие средств лечения и профилактики сальмонеллеза, борьба с этим инфекционным заболеванием голубей все еще остается актуальной проблемой и требует поиска путей ее решения, переориентации подходов к ее искоренению. Только вакцинация не решает проблему сальмонеллоносительства, заражения невакцинированного и иммунологически толерантного молодняка. Поэтому для специфической профилактики и борьбы с сальмонеллезом голубей перспективно применение бактериофагов.

Бактериофаги представляют собой живые мельчайшие вирусоподобные частицы, способные изменять биологические свойства бактерий, в том числе изменчивость и наследственность. Бактериофаг является облигатным паразитом – размножается только на живых бактериях и лизирует бактериальную клетку-возбудителя. Литическое действие бактериофагов осуществляется путем инфицирования чувствительных бактериальных клеток зрелыми фаговыми частицами.

Способность бактериофага к взаимодействию с микробной клеткой специфична и ограничена только определенным видом возбудителей для данной разновидности. Это означает, что сальмонеллезный бактериофаг оказывает литическое действие на патогенные сероварианты сальмонелл, не оказывая, в отличие от антибиотиков, влияния на облигатную кишечную микрофлору.

Высокоэффективные фаги активно применялись для борьбы с сальмонеллезом в животноводстве и птицеводстве. В птицеводстве зарекомендовали себя сальмофаги энтеритидис и пуллорум. Литической активностью в отношении культур сальмонелл тифимуриум, по данным Кузьмина В.А, обладают поливалентный сальмонеллезный ABCDE бактериофаг и бактериофаг сальмонеллезный жидкий.

Применение препаратов специфичных и литически высокоактивных бактериофагов для борьбы с сальмонеллезом голубей позволит обеспечить защиту от заболевания молодых голубей до вакцинного возраста, исключить поствакцинальные осложнения. К тому же, бактериофаговый препарат удобен в применении – может использоваться перорально с питьевой водой и способен санировать птицу от сальмонеллоносительства при трехкратном применении. В настоящее время ведутся работы по созданию фагового препарата S. typhimurium для борьбы с сальмонеллезом у голубей.

Способ лечения птиц при сальмонеллезе, вызванном salmonella typhimurium

Владельцы патента RU 2375075:

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ включает оральное введение биопрепарата на основе бактериофагов. При этом используют препарат, полученный путем смешивания в равных объемах в культуральной среде штаммов бактериофагов Phagum Salmonella typhimurium №5 Т3-ДЕП с концентрацией 3,6×10 8 БОЕ/см, Phagum Salmonella typhimurium №8 ME — ДЕП с концентрацией 1,0×10 7 БОЕ/см 3 , Phagum Salmonella typhimurium №9 MM-ДЕП — 1,4×10 8 БОЕ/см, консервированный 1%-ным раствором хинозола в конечной концентрации в фаговом лизате — 0,01%. Препарат вводят индивидуально или групповым способом с питьевой нехлорированной водой в разведении 1:10-1:20 в дозе от 0,25 до 5 мл в зависимости от живой массы птицы каждые 12 часов первые 1-3 суток. Затем препарат вводят каждые 48 часов до выздоровления. Одновременно дополнительно птице вводят пробиотический препарат Лактобифадол с содержанием в 1 г 80 млн живых клеток бифидобактерий вида В. adolescentis и 1 млн лактобактерий вида L.acidophilum из расчета 0,4 г/кг массы в первые 10 суток лечения, далее — 0,2 г/кг массы в течение 20 суток. Способ повышает эффективность и сокращает продолжительность лечения, уменьшает или исключает применение антибиотиков, позволяет улучшить качество мяса птицы». 1 табл.

Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности, к разработке способа лечения сальмонеллеза птиц. Сальмонеллез является одной из самых распространенных бактериальных болезней птиц и наносит значительный ущерб, складывающийся из потерь от гибели птицы, снижения продуктивности, отставания в росте и развитии, снижения оплодотворяемости яиц, потери спортивных, служебных и декоративных качеств.

Известно, что серовариант Salmonella typhimurium (S.typhimurium), относящийся к серогруппе В, — является доминирующим возбудителем сальмонеллеза у уток, гусей (80-90%), голубей (98%). S. typhimurium является также одним из основных возбудителей сальмонеллеза индюков, перепелов, лебедей, фазанов, кур, вызывает сальмонеллез у телят, поросят, других животных и пищевые токсикоинфекции человека [2, 3, 5, 6].

Существующие способы лечения сальмонеллеза птиц предусматривают проведение общих ветеринарно-санитарных мероприятий и ориентированы на широкое применение антимикробных препаратов [2].

Известные способы малоэффективны, так как у сальмонелл отмечается широкий спектр антибиотикоустойчивости, а требования к экологическому качеству продукции птицеводства накладывают ограничения на применение антибиотиков [7].

Существующие вакцины против S.typhimurium птиц не являются лечебными препаратами, не ликвидируют инфекцию полностью, так как не устраняют сальмонеллоносительства [2].

Особенно остро стоит проблема лечения при заражении высокопородной птицы, склонной как к иммунодефицитным состояниям, так и к появлению аллергий на фоне антибиотикотерапии. Проблемным является также иммунологически толерантный молодняк.

Известен также способ лечения сальмонеллеза — птиц с применением активных бактериофагов. Они специфичны, лизируют бактериальную клетку-возбудителя, обеспечивают бактерицидный эффект, в отличие от антибиотиков, не нарушают естественную микрофлору. Фаги могут быть применены с первых дней жизни, не вызывают побочных эффектов и осложнений, экологически безопасны, т.к. после лизиса бактерий-мишеней (сальмонелл) они элиминируются.

Используемые в животноводстве фаговые препараты против сальмонеллеза не могут быть высокоэффективны птице, так как основными компонентами содержат фаги S.dublin, S.enteritidis, S.choleraesuis и S.typhimurium; последний — в невысокой концентрации с ограниченным спектром литической активности.

В промышленном птицеводстве для лечения и профилактики сальмонеллеза кур применяют сальмофаги энтеритидис и пуллорум, но только при инфицировании S.enteritidis и S.gallinarum-pullomm. Эти препараты не эффективны или слабоэффективны при лечении сальмонеллеза, вызванного S.typhi-murium у птиц[1].

Известен также пробиотический препарат Лактобифадол, обладающий лечебно-профилактическим эффектом при сальмонеллезе, эшерихиозе и других желудочно-кишечных болезнях млекопитающих животных и птицы, вызываемых патогенными и условно-патогенными бактериями [4, 8].

В задачу наших исследований входила разработка эффективного способа лечения сальмонеллеза птиц, вызванного Salmonella typhimurium, при повышении экологической безопасности и безвредности применения.

Это достигается применением препарата Бактериофаг тифимуриум в комплексе с пробиотиком Лактобифадол. Предлагаемый способ отличается тем, что используют препарат Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза, содержащий суспензию высокоактивных штаммов бактериофагов Phagum Salmonella typhimurium №5 Т3-ДЕП с концентрацией 3,6×10 8 БОЕ/см 3 , Phagum Salmonella typhimurium №8 ME — ДЕП с концентрацией 1,0×10 7 БОЕ/см 3 , Phagum Salmonella typhimurium №9 MM-ДЕП — 1,4×10 8 БОЕ/см 3 , консервированный 1%-ным раствором хинозола в конечной концентрации в фаговом лизате — 0,01% орально индивидуально или групповым способом с питьевой нехлорированной водой в разведении 1:10-1:20 в дозе от 0,5 до 5 мл в зависимости от живой массы птицы каждые 12 часов первые 1-3 суток, затем — каждые 48 часов до выздоровления; одновременно применяют пробиотический препарат Лактобифадол с содержанием в 1 г 80 млн живых клеток бифидобактерий вида В.adolescentis и 1 млн лактобактерий вида L.acidophilum из расчета 0,4 г/кг массы в первые 10 суток лечения, далее 0,2 г/кг массы в течение 20 суток.

Бактериофаг тифимуриум специфичен к возбудителю S. typhimurium, содержит суспензию высокоактивных штаммов бактериофагов к Salmonella typhimurium Phagum Salmonella typhimurium №5 Т3-ДЕП с концентрацией 3,6×10 8 БОЕ/см 3 , Phagum Salmonella typhimurium №8 MЁ — ДЕП с концентрацией 1,0×10 7 БОЕ/см 3 , Phagum Salmonella typhimurium №9 MM-ДЕП — 1,4×10 БОЕ/см 3 , выделенных Пименовым Н.В. и Чирковой И.В.

Штаммы депонированы в ФГУ ВГНКИ во «Всероссийской коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ВГКШМ-вет)» г.Москва, в частности:

1. Штамм бактериофага Salmonella typhimurium №8 MЁ предложен в качестве производственного для изготовления лечебно-профилактических препаратов, депонирован 16 октября 2007 г., регистрационный номер Phagum Salmonella typhimurium №8 MЁ-ДЕП.

2. Штамм бактериофага Salmonella typhimurium №5 ТЗ предложен в качестве производственного для изготовления лечебно-профилактических препаратов, депонирован 16 октября 2007 г., регистрационный номер Phagum Salmonella typhimurium №5 ТЗ-ДЕП.

3. Штамм бактериофага Salmonella typhimurium №9 MM предложен в качестве производственного для изготовления лечебно-профилактических препаратов, депонирован 16 октября 2007 г., регистрационный номер Phagum Salmonella typhimurium №9 ММ-ДЕП.

Препарат формируют путем смешивания указанных фагов в равных объемах в культуральной среде, консервированной хинозолом, 1%-ным раствором в конечной концентрации, в фаговом лизате — 0,01%.

Бактериофаг тифимуриум обладает лечебным и профилактическим эффектом, не дает осложнений при передозировке, санирует организм от сальмонеллоносительства, является перспективным компонентом комплексной системы профилактики сальмонеллезной инфекции.

Пробиотик Лактобифадол включает в 1 г 80 млн живых клеток бифидобактерий вида В.adolescentis и 1 млн лактобактерий L.acidophilum, которые характерны для микробиоценоза животных. Обладает свойствами синбиотика, штаммы устойчивы к широкому диапазону pH, желчи, имеют выраженную кислотообразующую, антагонистическую, ферментативную активность. Изготовлен методом контактно-сорбционной сушки биомассы, обеспечивающей максимальную сохранность биологических свойств микроорганизмов-доноров нормальной пристеночной микрофлоры.

Способ осуществляют следующим образом:

Больной птице после подтверждения диагноза вводят Бактериофаг тифимуриум: птице массой до 1 кг — 0,5 мл (голубям, перепелам, попугаям, канарейкам, цыплятам), птице массой 1-5 кг (фазанам, курам, уткам) — 1 мл, птице массой 5-10 кг (уткам, индоуткам, селезням, гусям, лебедям) — 3 мл, птице массой 10-20 кг (гусям, лебедям, индюкам) — 5 мл 1 раз в сутки. Молодняку голубей, перепелок — в дозе 0,25 мл. Препарат применяют перорально индивидуально или групповым способом с питьевой, кипяченой и остуженной до 25-30°С водой в разведении из расчета по объему 1:10-1:20 или из расчета разведения на 5-10 мл воды на 1 кг живой массы птицы. Не допускается для разведения хлорированная вода или обработанная и содержащая другие дезинфектанты. В течение трех часов до выпаивания препарата птицу выдерживают без поения.

При лечении сальмонеллеза, вызванного S.typhimurium длительность курса с применением бактериофага каждые 12 часов устанавливают индивидуально, исходя из тяжести эпизоотического процесса и используемых средств терапии. Основная схема применения: каждые 12 часов в первые 1-3 суток, затем — каждые 48 часов 2-3 введения.

Одновременно с бактериофагом с первых суток лечения больной птице назначают пробиотик Лактобифадол в лечебной дозе 0,4 г/кг массы ежедневно в течение 10 суток, далее 0,2 г/кг массы в течение 20 суток.

Применение бактериофагового препарата и Лактобифадола при необходиморсти можно сочетать с лечением эффективным антибиотиком.

Испытание эффективности препарата бактериофага тифимуриум и пробиотика Лактобифадола в остром опыте проводили на 30 цыплятах 14-дневного возраста в сентябре 2007 г. в виварии ФГОУ ВПО МГАВМиБ. Для этого были созданы три группы: две опытные (по 10 цыплят) и контрольная (10 цыплят), которых кормили и содержали по принципу аналогов.

Заражение цыплят всех групп проводили смесью из 2 изолятов S.typhimurium (с вирулентностью для белых мышей при подкожном инъецировании 4 тыс. микробных клеток) в одинаковом количестве каждого изолята орально в общей дозе 2 млн микробных клеток (дозу определяли, используя оптические стандарты мутности энтеробактерий).

После появления клинических признаков заболевания (потеря аппетита, одышка, угнетение, взъерошенность оперения, иногда — диарея) цыплятам первой опытной группы орально вводили Бактериофаг тифимуриум из расчета 0,5 мл при помощи автоматической пипетки-дозатора. Обработку проводили трижды с интервалом 12 часов, а затем с интервалом 48 часов еще 2 раза. За три часа до выпойки бактериофага тифимуриум цыплят выдерживали без поения. Суспензию Лактобифадола вводили ежедневно из расчета 0,4 г на 1 кг живой массы. Цыплятам второй опытной группы использовали стандартный метод лечения с использованием энрофлоксацина — энрофлон 10%-ный раствор в дозе 0,5 мл на 1 л воды 5 дней согласно временного наставления.

Цыплят контрольной группы бактериофагом тифимуриум не обрабатывали и инфицировали смесью культур S.typhimurium в тех же дозах, что и в опытных группах.

За птицей наблюдали 15 дней, после чего проводили убой. Бактериологическое исследование трупов павших и убитых цыплят проводили по схеме: посевы из паренхиматозных органов, крови сердца и красного костного мозга на МПА, МПБ, агар Эндо, висмут-сульфитный агар, окраска мазков-отпечатков и мазков растущих культур по Граму, реакция агглютинации с O-комплексными и О- и Н-агглютинирующими монорецепторными сальмонеллезными сыворотками. Результаты лабораторных испытаний представлены в таблице.

Проведенные исследования показали, что в контрольной группе летальность составила 90%. Все павшие цыплята имели характерные клинические признаки и патологоанатомические изменения: одышку, потерю аппетита, диарею, энтерит, ринит и др. При бактериологическом исследовании из печени с желчным пузырем, крови сердца, крови костного мозга, головного мозга, селезенки этих цыплят выделили S.typhimurium, обладающую характерными свойствами.

Применение с лечебной целью бактериофагового препарата в сочетании с пробиотиком Лактобифадол обеспечило выраженный лечебный эффект при непосредственном заражении вирулентными изолятами S.typhimurium в высоких дозах. Сохранность цыплят при таком способе лечения составила 100%, сроки выздоровления 3-5 дней, а сальмонеллоносительства на 15 сутки не было установлено.

Сочетанное применение Бактериофага тифимуриум и Лактобифадола более эффективно по сравнению с традиционной схемой лечения энрофлоксацином, так как в опытной группе 2 летальность составила 30%, а скрытое носительство 20%.

Пример 2. Терапевтическая эффективность Бактериофага тифимуриум и пробиотика Лактобифадол на голубятнях в Подольском и Домодедовском районах Московской области.

Клиническая картина сальмонеллеза у голубей проявлялась взъерошенностью оперения, угнетением, одышкой, потерей координации движения, потерей способности к полету, иногда — «вертячкой», отказом от корма; помет становился жидким серого и зеленого цвета с примесью крови и слизи; у некоторых голубей проявлялся ринит. Диагноз был подтвержден бактериологическими исследованиями и методом молекулярной диагностики (ПЦР).

В сентябре 2006 года в двух голубятнях в п.Поливанове Подольского района Московской области (всего 175 голубей: пермские, гривуны, свердловские, синие) болезнь выявили при заболеваемости 14,3% и ежедневной гибели 3 голубей (1,7%). При этом вспышка была отмечена на фоне применения байтрила. Выделенная S.typhimurium обладала высокой чувствительностью к клафорану, средней — к ампициллину, низкой — к энрофлоксацину, ципрофлоксацину, доксициллину, резистентностью — к азитромицину, гентамицину, эритромицину, тетрациклину, мономицину, оксициллину, линкомицину. Проведенный курс терапии бактериофагом тифимуриум в дозе 0,5 мл на голубя при групповой выпойке с водой в разведении 1 к 20 трижды с интервалом 48 часов и дачей с кормом Лактобифадола в дозе 0,4 г/кг в течение 10 дней, далее в дозе 0,2 г/кг массы еще в течение месяца остановили развитие заболеваемости и гибели птицы. С 3-х суток после начала лечения состояние заболевших голубей улучшилось, появилась активность, восстановился аппетит. Консистенция помета постепенно нормализовалась, его цвет к 4-6 суткам стал светло-коричневым. Через 14 суток при бактериологическом исследовании смывов из клоаки больных и других голубей из исследуемых голубятен п.Поливанове (всего 47 проб — 27,3%) бактерии рода Salmonella не выделялись. При контрольных исследованиях в ПЦР через 30 дней — положительных результатов не было в 20 пробах крови из оздоровленных голубятен. В период наблюдения 6 месяцев рецидивов сальмонеллеза не отмечали.

В голубятне г.Домодедово (150 голубей: почтовые) вспышка сальмонеллеза возникла в осенний период 2005 года. При этом заболеваемость среди молодняка 2-3-месячного возраста, полученного от основных самок, составила 100%, заболеваемость среди всех голубей — 80% (120 из 150) с летальностью 65% (78 из 120 голубей) при полной гибели молодняка в течение 22-дневного периода. Клинически болезнь проявлялась в виде водянистых фекалий серого цвета, иногда с примесью зелени и крови, быстрой потери живой массы, дегидратации, уменьшения мышечной массы в области киля (голуби «сохли»), угнетения. В 19 случаях (15,8%) — в виде нервных явлений: дрожь, — запрокидывание головы, «вертячка». До применения Бактериофага и Лактобифадола владелец выпаивал птице энрофлон и бактисубтил, что ослабило развитие эпизоотического процесса, но не остановило инфекцию. Из трупов голубей выделили высоковирулентный изолят S.typhimurium (LD50 для белых мышей массой 12-16 г — 5495 кл. при подкожном инъецировании), обладающий низкой чувствительностью и резистентностью к 28 тестируемым антибиотикам, кроме имипенема. Применение последнего не представляется возможным для птиц из-за необходимости внутривенного введения.

Выпойку бактериофага тифимуриум в неблагополучной голубятне проводили согласно разработанной и использованной в лабораторном эксперименте схеме. Обработку проводили трижды с интервалом 12 часов, затем еще трижды с интервалом 48 часов. Лактобифадол давали в дозе 0,4 г/кг массы в течение первых 10 дней лечения, далее в -дозе 0,2 г/кг массы еще в течение 20 суток. Параллельно в голубятне провели дезинфекцию 4%-ным раствором хлорамина.

Случаи гибели голубей прекратились со вторых суток предложенного и примененного способа лечения. Фекалии в течении 3-4 дней приобрели естественную консистенцию и цвет, голуби начали активно потреблять корм (зерно, мука). Восстановление живой массы отмечалось к 20-30 дню после прекращения диареи. При бактериологических исследованиях смывов из клоаки от 50 голубей бактерий рода Salmonella не выделяли.

Пример 3. Терапевтическая эффективность Бактериофага тифимуриум и пробиотика Лактобифадол на фазанах и утках передвижного частного зоопарка «Ташир».

Заболеваемость уток, фазанов и других птиц сальмонеллезом наблюдали в частном передвижном зоопарке (вольеры в автофургонах, приписанных к государству Армения) в ноябре 2005 г. Взрослая птица имела матовое взъерошенное оперение, угнетение. У фазанов 4-5 месяцев отмечали периодически жидкий помет зеленого цвета, отставание в росте. Клиническая картина острого заболевания проявлялась преимущественно у молодых фазанов и характеризовалась повышением температуры тела до 42,5-43,0°С, угнетением, понижением аппетита, взъерощенностью оперения. Из 28 фазанов разных пород типичную клиническую картину заболевания отмечали у 6(21%). 2 фазана 3-месячного возраста пали. S.typhimurium выделяли из смывов клоаки всех фазанов. Диагноз был подтвержден бактериологическими исследованиями и методом молекулярной диагностики (ПЦР).

В вольерах содержались также утки, которые положительно реагировали в ПЦР на сальмонеллез. При бактериологическом исследовании у них из клоаки в 100% случаев выделена S.typhimurium. В 25-40-дневном возрасте среди утят отмечалась инфекция с развивитием унетения, анорексии, повышения температуры до 43,5-44°С, диареи и гибели (пали 5 утят из 8).

Выпойку Бактериофага тифимуриум против сальмонеллеза проводили групповым способом всей птице зоопарка из расчета: перепелам — по 0,5 мл препарата, фазанам, уткам — по 1 мл, селезням, павлинам — по 3 мл, гусям, лебедям — по 5 мл трижды д. с интервалом 12 часов, четвертую и пятую выпойки — через 48 часов. Препарат растворяли в воде из расчета 1:20. За три часа предварительно птицу оставляли без поения. Лактобифадол давали ежедневно всей птице в течение 10 дней в дозе 0,4 г/кг массы, далее в течение 20 дней в дозе 0,2 г/кг массы.

На 3 сутки после начала лечения состояние птицы улучшилось, температура нормализовалась, восстановился аппетит, помет оформился и приобрел серо-коричневую окраску. Гибель птицы больше не отмечали. При бактериологическом анализе смывов из клоаки у всех фазанов, уток, перепелов и павлинов зоопарка, проведенном через 15 суток, бактерий рода Salmonella не выделяли.

Проведенные исследования показали эффективность способа лечения сальмонеллеза птиц, вызванного S.typhimurium. Бактериофагом тифимуриум и пробиотиком Лактобифадол.

Такой способ лечения позволяет:

а) с помощью видоспецифичного бактериофагового препарата лизировать бактериальную клетку-возбудителя, обеспечивая без применения антибиотика бактерицидный эффект;

б) применять фаги с первых дней жизни, поскольку они элиминируются после лизиса бактерий-мишеней (сальмонелл), не вызывают побочных эффектов, аллергий и других осложнений;

в) добиваться неспецифического терапевтического эффекта за счет двух видов бактерий, входящих в пробиотический препарат Лактобифадол (лакто- и бифидобактерии), которые относятся к доминирующим по численности и физиологической значимости родам резидентной микрофлоры кишечника птицы. Они обладают выраженной антагонистической активностью в отношении гнилостной, патогенной и условно-патогенной микрофлоры, что обеспечено синтезом лизоцима, интерферонов, перекиси водорода, органических кислот, других антагонистических механизмов, включая конкурентную адгезию на слизистой кишечника и иммуномодулирующие эффекты;

г) получить более выраженный терапевтический эффект без последующего скрытого сальмонеллоносительства за счет специфического воздействия на возбудителя Бактериофага тифимуриум и неспецифического терапевтического действия пробиотика Лактобифадол, что обеспечивает эффективное воздействие на разные мишени патологического процесса, приводит к суммарному терапевтическому эффекту и подтверждается результатами лечения.

Предложенный способ апробирован с положительным результатом в сентябре 2007 г. в виварии ФГОУ ВПО МГАВМиБ на цыплятах 14-дневного возраста; в сентябре 2006 года в двух голубятнях поселка Поливанове Подольского района Московской области на голубях пород пермские, гривуны, свердловские, синие; на почтовых голубях в городе Домодедово Московской области в октябре-ноябре 2005 года; в ноябре 2005 г. в городе Москве в частном передвижном зоопарке «Ташир» (Армения) на фазанах, утках, перепелах и павлинах.

Предложенный способ найдет применение для оздоровления птицеводческих хозяйств, питомников, вольеров и голубятен, неблагополучных по сальмонеллезу, вызванному S.typhimurium, позволит резко сократить и ликвидировать сальмонеллез птиц, получать здоровый приплод, поголовье и улучшить качество мяса птицы.

1. Ганюшкин В.Л. Бактериофаги сальмонелл и их применение в ветеринарии. — Ульяновск, 1988. — 84 с.

2. Гусев В.В. Сальмонеллезная инфекция у голубей. / Гусев Вал. В., Гусев Вик. // «Птицеводство» №5; 2003. — С.48-53

3. Гусев В.В. Разработка технологии производства вакцины против сальмонеллеза голубей. Дис. на степ. канд. биол. наук. — Оболенск, 2005 г. — С.48-53).

4. Данилевская Н.В. Метод селективной деконтаминации и бактериотерапии с использованием пробиотического препарата лактобифадол при выращивании цыплят-бройлеров. / Данилевская Н.В., Субботин В.В. // Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве. Матер. Межд. науч. — практ. конф. — СПб., 2004. — С.237-238.

5. Куриленко А.Н., Пименов Н.В., Ленев С.В. и др. Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур. — М. МГАВМиБ., 2002 г. — 35 с.

6. Осидзе Д.Ф. Биологические и химиотерапевтические средства профилактики и лечения заболеваний продуктивных животных. / Сб. ст. ВГНКИ., 1983. — 122 с.

7. Пименов Н.В. Антибиотикорезистентность сальмонелл, выделенных от домашних голубей. / Пименов Н.В., Данилевская Н.В. // «Ветеринария». — 2006. — №9. С.20-24.

8. Субботин В.В Применение пробиотического препарата лактобифадол при откорме бройлеров. / Субботин В.В., Данилевская Н.В. // «Ветеринария и кормление», 2004, №1. С.11-13.

ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БАКТЕРИОФАГА S-394 ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛЕЗОВ ПТИЦ

1 ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава России (г. Новосибирск)
2 ФБУН ГНЦ вирусологии и биотехнологии «Вектор» (п. Кольцово, г. Новосибирск)

Получены данные об эффективности бактериофага S-394 относительно штаммов Salmonella в экспериментах на цыплятах, что обуславливает возможность его применения для лечения и профилактики сальмонеллезов птиц. Выявлены различия в концентрации бактериофага, выделенного из органов цыплят через 20 часов после выпаивания фага.

Ключевые слова: бактериофаг, сальмонелла, птицеводство, фаготерапия.

Введение. Развитие птицеводческой промышленности неизбежно сопровождается концентрацией поголовья птицы и увеличением заболеваемости инфекционными болезнями, в том числе и сальмонеллезом. Сальмонеллез птиц наносит значительный экономический ущерб, который слагается из снижения яйценоскости кур, количества оплодотворенных яиц, высокой летальности эмбрионов, потери привесов молодняка, значительных затрат на диагностические и лечебно-профилактические мероприятия [1]. Известно, что основными возбудителями сальмонеллеза птиц являются Salmonella enteritidis [7] и Salmonella typhimurium [3, 8]. Однако спектр возбудителей в разных хозяйствах может изменяться. Преобладание тех или иных штаммов определяется различными путями заноса инфекции, например с кормом.

В последние годы сальмонеллы приобретают лекарственную устойчивость ко многим антибиотикам [4]. Антибиотикообработки также не позволяют избавить птицу от сальмоносительства, не способны профилактировать и ликвидировать инфекцию, а предотвращают лишь массовое клиническое проявление заболевания [5]. Кроме нанесения ущерба птицеводческой отрасли, сальмонеллез имеет большую социальную значимость — увеличивается эпидемиологическая роль таких продуктов питания, как мясо кур и яйца.

Широкое распространение среди людей и животных, отсутствие тенденции к снижению заболеваемости в большинстве стран мира, увеличение инфицированности сальмонеллами различных объектов среды показывает необходимость поиска новых эффективных мер борьбы с заболеванием [2, 6]. Таким образом, изучение возможности применения бактериофагов для лечения сальмонеллеза является актуальной задачей экологии человека.

Цель исследования: оценка эффективности использования бактериофага S-394 для профилактики и лечения сальмонеллезов птиц.

Материалы и методы. Экспериментальная часть работы была выполнена в 2012–2013 годах на базе отдела биофизики и экологических исследований ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор».

В работе использовали бактериофаги, полученные из коллекции ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор»: S-394, депонированный в коллекции под номером Ph-1240, бактериофаги SS-2, PS-2, DS-1, PS-465, № 1.

В работе были использованы коллекционные штаммы бактерий Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis, Shigella sonnei, Escherichia coli. Также был использован штамм Salmonella sp. 1, выделенный в ходе санитарных мероприятий на птицефабрике.

Органы цыплят были предоставлены С. В. Леоновым в рамках договора о творческом сотрудничестве с Институтом экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока академии сельскохозяйственных наук.

В работе использовали следующие питательные среды и растворы: рыбно-пептонный плотный агар, верхний мягкий агар, висмут-сульфитный агар, LB-агар, хлороформ, физиологический раствор, раствор глюкозы 40 %, одномолярный раствор MgSO4.

Биологические свойства бактериофага изучали стандартными методами. Фаголизат получали путем заражения фагом бактериальной культуры, находящейся в логарифмической фазе роста. Определение литической активности проводили микрометодом. Антибиотикорезистентность определяли диско-диффузионным методом.

Результаты исследования и их обсуждение. В ходе санитарных мероприятий на птицефабрике был выделен штамм Salmonella sp. 1. Нами был проведен поиск бактериофага, активного в отношении данного штамма. Для этого изучали спектр литической активности коллекционных бактериофагов, лизирующих сальмонеллы. По сравнению с бактериофагами PS-2, SS-2, PS-465, № 1 и DS-1 фаг S-394 показал более широкий спектр литической активности как в отношении сальмонелл, так и в отношении штаммов E. coli и Shigella.

Среди сальмонелл бактериофаг S-394 лизировал не только штамм Salmonella sp. 1, используемый в нашей работе, но и штаммы S . typhimurium и S. enteritidis, являющиеся основными возбудителями сальмонеллеза. Необходимо отметить, что высокий урожай бактериофага S-394 можно получать на условно патогенных штаммах Escherichia coli, что безопасно при масштабных культивированиях для создания препаратов на основе этого бактериофага для ветеринарии против Escherichia coli, Salmonella, Shigella, а также для уничтожения и предотвращения больничных инфекций. Таким образом, для нашего исследования был выбран именно бактериофаг S-394.

Для определения морфологии негативных колоний высевали исследуемый бактериофаг на чашки Петри с газоном бактериальной культуры E. coli. Было показано, что бактериофаг S-394 образует округлые с ровным краем, прозрачные, светлые, четкие негативные колонии одного типа диаметром от 0,1 до 0,2 см. Таким образом, можно сделать вывод о том, что данный бактериофаг является вирулентным и приводит к быстрой гибели зараженной клетки.

Изучение антибиотикорезистентности штамма Salmonella sp . 1 показало, что к 9-ти из 20-ти антибиотиков исследуемый штамм проявил чувствительность. Однако в отношении остальных 11-ти антибиотиков не было отмечено ингибирования роста микроорганизма. Данный штамм оказался полирезистентным по отношению к традиционно применяемым для лечения сальмонеллеза животных и человека антибиотикам, таким как хлорамфеникол, линкомицин, энрофлоксацин и др.

Полученный фаголизат вводился трехсуточным цыплятам методом выпаивания. Каждому птенцу было введено по 1 мл препарата с концентрацией 10 8 фаговых частиц/мл. Первая группа цыплят получала только бактериофаг, а вторая предварительно была заражена культурой Salmonella sp. 1 с титром 10 8 КОЕ/мл. Через определенный промежуток времени (2, 4, 6, 8, 20 часов) производился забой птицы, и у каждого цыпленка были извлечены такие внутренние органы как селезенка, печень и кишечник для дальнейшего исследования. Опыт проводился в двух повторностях.

Затем определяли присутствие бактериофага и его количественное содержание в органах всех цыплят. Для этого каждый орган помещали в пробирку с физиологическим раствором и измельчали. Полученную суспензию в каждой пробирке обрабатывали хлороформом и высевали на газоны культуры Salmonella sp. 1, инкубировали в термостате 24 часа и проводили учет результатов.

Группа цыплят, получавших только бактериофаг (контроль). До 20 часов наблюдали присутствие фага в кишечнике, причем наибольшие концентрации — в течение первых 2, 4 часов: от 10 3 до 10 4 БОЕ на 1 г ткани. Также отмечали незначительные количества фага в ткани селезенки у цыплят, забой которых происходил через 4 часа после выпаивания фага. Можно предположить, что проникновение фага в ткани цыплят уже через 2 часа обусловлено его малыми размерами (75–80 нм). Такая скорость распределения является преимуществом для применения бактериофага в терапевтических целях. В течение 20 часов наблюдалось понижение концентрации бактериофага. К 20 часам его концентрация составляла 2 × 10 3 БОЕ/г (см. рис.). Это можно объяснить тем, что для размножения фагу необходима чувствительная к нему бактериальная культура. Отсутствие таковой среди микрофлоры желудочно-кишечного тракта, в печени и селезенке не позволяет ему размножаться и обуславливает снижение концентрации. Так, фаговые частицы разрушаются и постепенно выводятся из организма.

Группа цыплят, зараженная культурой Salmonella sp. 1 и получавшая бактериофаг в качестве лечения. В течение первых часов в исследуемых тканях бактериофаг количественно не определялся. Незначительные количества присутствовали в двухчасовых пробах (кишечник и печень одного цыпленка), бактериофаг выявлен после обогащения пробы. Также из четырехчасовых проб удалось накопить бактериофаг из кишечника второго цыпленка. Однако количественный анализ данных проб не показал присутствия значительных количеств фага. Через 6 часов из кишечника одного цыпленка был выделен фаг в концентрации 3,1 × 10 2 БОЕ на 1 г ткани, что является сравнительно небольшим количеством. Так, в шестичасовых пробах с выпаиванием бактериофага без предварительного заражения культурой концентрация фага достигала 10 3 БОЕ/г. Однако, к 20 часам концентрация фага во всех органах обоих цыплят увеличилась до 10 3 ‒10 4 БОЕ на 1 г ткани (см. рис.). При этом наибольшие количества наблюдаются в печени и кишечнике. Возможно, такой характер динамики определяется тем, что в первые часы фаг находится в латентном периоде взаимодействия с бактериальной клеткой, а затем происходит лизис клеток и выход фаговых частиц.

Выделение бактериофага из проб с печенью и селезенкой цыплят через 20 часов после введения им препарата может свидетельствовать о том, что исследуемый бактериофаг сохраняет способность к размножению не только в желудочно-кишечном тракте, но и в других внутренних органах и тканях.

Концентрация бактериофага, выделенного из органов цыплят через 20 часов после выпаивания фага

Выводы. Изучены биологические свойства бактериофага S-394 (литическая активность, спектр литического действия, морфология негативных колоний). Установлена высокая антибиотикоустойчивость культуры Salmonella sp. 1. Выявлено, что в органах цыплят бактериофаг распределяется преимущественно в кишечнике. При отсутствии специфичных бактериальных клеток через 20 часов бактериофаг практически полностью выводится из организма. При наличии в организме чувствительной к нему культуры Salmonella sp. 1 происходит активный лизис бактериальных клеток и увеличение концентрации бактериофага, что обуславливает возможность его практического применения для лечения сальмонеллеза птиц.

  1. Борисенкова А. Н. Система контроля бактериальных болезней: научное издание / А. Н. Борисенкова // Птицеводство. — 2004. — № 8. — С. 13–16.
  2. Ванханен В. В. Сальмонеллез — эпидемиология и профилактика (научно-практическое издание) / В. В. Ванханен, В. Д. Ванханен, А. Д. Усенко ; под ред. Ванханена В. Д. — Донецк, 2003. — 48 с.
  3. Осидзе Д. Ф. Инфекционные болезни животных: справочник / Ю. Ф. Борисович, Л. В. Кирилов. Под ред. Д. Ф. Осидзе. — М.: Агропромиздат, 1987. — 287 с.
  4. Пименов Н. В. Антибиотикорезистентность сальмонелл, выделенных у домашних голубей / Н. В. Пименов, Н. В. Данилевская // Ветеринария. — 2006. — № 9. — С. 20–24.
  5. Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур / А. Н. Куриленко [и др.]. — М. : МСХ / МГАВМиБ, 2002. — 34 с.
  6. Рожнова С. Ш. Сальмонеллезы : проблемы и решения / С. Ш. Рожнова // Эпидемиология и инфекц. болезни. — 1999. — № 2. — С. 39–41.
  7. Chung Y. H. Prevalence and antibiotic susceptibility of Salmonella isolated from foods in Korea from 1993 to 2001 / Y. H. Chung, S. Y. Kim, Y. H. Chang // Journal of Food Protection. — 2003. — Vol. 66, N 7. — P. 1154–1157.
  8. Flensburg J. Programs to control or eradicate Salmonella in animal production in Denmark / J. Flensburg // Acta Veterinaria Scandinavia. — 1999. — N 91. — P. 51–58.

Учредитель: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России)

Государственная лицензия ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России
на образовательную деятельность:
серия ААА № 001052 (регистрационный № 1029) от 29 марта 2011 года,
выдана Федеральной службой по надзору в сфере образования и науки бессрочно

Свидетельство о государственной аккредитации ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России:
серия 90А01 № 0000997 (регистрационный № 935) от 31 марта 2014 года
выдано Федеральной службой по надзору в сфере образования и науки
на срок по 31 марта 2020 года

Адрес редакции: 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52
тел./факс: (383) 229-10-82, адрес электронной почты: mos@ngmu.ru

Выпуск сетевого издания «Медицина и образование в Сибири» (ISSN 1995-0020)
прекращен в связи с перерегистрацией в печатное издание «Journal of Siberian Medical Sciences» (ISSN 2542-1174). Периодичность выпуска — 4 раза в год.

Архивы выпусков «Медицина и образование в Сибири» доступны на сайте с 2006 по 2016 годы, а также размещены в БД РИНЦ (Российский индекс научного цитирования) на сайте elibrary.ru.

Средство массовой информации зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор) —
Свидетельство о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-72398 от 28.02.2018.

© ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России, 2018

22.05.2017
Сетевое издание «Медицина и образование в Сибири» преобразовано в печатное издание «Journal of Siberian Medical Sciences». Дата перерегистрации: 18.05.2017. Свидетельство о СМИ: ПИ № ФС 77-69793.
Подробнее >>

03.04.2017
С 2017 года Издательско-полиграфическим центром НГМУ осуществляется выпуск печатного издания «Сибирский медицинский вестник».
Подробнее >>

08.02.2016
Уважаемые авторы! Открыт прием статей во 2-й номер 2016 года (выход номера — середина мая 2016 г.).
Подробнее >>

11.01.2016
Уважаемые авторы! Продолжается прием статей в 1-й номер 2016 года (выход номера — конец февраля 2016 г.).
Подробнее >>

28.12.2015
Уважаемые авторы! Сетевое издание входило в Перечень ВАК до 30 ноября 2015 г. Работа по включению издания в новый Перечень ВАК продолжается.
Информация о формировании Перечня ВАК
Подробнее >>

Еще по теме:

  • Как лечить гепатит с генотип 3 Лечение гепатита - С (генотип 3а) Виктор Спешу поделиться, как протекает лечение гепатита - С (генотип 3а) противовирусной терапией, а это Реальдирон 3 МЕ (инъекции через день), и Рибаверин - Медуна (по четыре таблетки в день) + […]
  • Анализ на токсоплазмоз g расшифровка Расшифровка анализа на токсоплазмоз. Расшифровка анализа на токсоплазмоз Расшифровка анализа на токсоплазмоз. В этой статье поговорим об анализах на токсоплазмоз, которые делают людям. А еще точнее – о результатах этих […]
  • Рецепты из алоэ при туберкулезе Туберкулез Лечение туберкулеза народными средствами Что такое туберкулез? Туберкулез. Хотя открытие антибиотиков резко сократило количество заболеваний туберкулезом, все же их достаточно в списке причин смертельных исходов, Как […]
  • Помогает ли чеснок при ангине Ангина и чеснок Эта статья посвящена теме - ангина и чеснок. Здесь мы опубликуем народные рецепты с чесноком, которые помогут вам при ангине. Так как чеснок превосходный природный антисептик - при любых простудных заболеваниях и […]
  • Лечение легочного кровотечения при туберкулезе Лечение легочного кровотечения при туберкулезе 6. Лечение туберкулеза. 6.7. Лечение легочных кровотечений при туберкулезе легких. Легочные кровотечения и кровохарканья туберкулезной этиологии, по современным статистическим […]
  • Обязательное исследование на вич Обязательное исследование на вич Кто подлежит обследованию на ВИЧ Из Федерального закона от 30 марта 1995 г. № 38-ФЗ "О предупреждении распространения в Российской Федерации заболевания, вызываемого вирусом иммунодефицита человека […]